Здравствуйте, коллеги! 👋🏻

После того или иного способа гистологической проводки образцы ткани
должны быть залиты в парафин или другие заливочные среды. 🔒

🔑В этом выпуске «Образователя» мы остановимся на ключевых
моментах процесса заливки в парафин, дадим практические советы по изготовлению парафиновых блоков и поговорим о том, как подготовить их к микротомии.

После проводки желательно максимально быстро залить образцы ткани
в парафин, поскольку избыточное пребывание в нем объектов
может их уплотнить. Ткани можно задерживать в заливочном
центре или последней станции парафина на срок около 1-2
часов, но не более. Мелкие биопсии особенно не
рекомендуется передерживать в парафине, так как это пересушивает их.
В некоторых случаях, например, при проводке в двух корзинах
карусельного процессора, материал из второй корзины должен
быть выдержан в последнем парафине дополнительное время,
ведь финиш процесса проводки считается по первой корзине. В этом случае первая корзина находится в последнем парафине, а вторая — в предпоследнем, следовательно, в ней образцы будут недопроведенными по времени этой станции. Здесь можно отправить на заливку первую корзину, а на её место поместить вторую.

Заливка материала

Заливку можно выполнять двумя способами: вручную, используя
разные формы и автоматически, с помощью заливочного
центра. В заливочном центре есть таймеры старта и отсрочки. Желательно заливочный центр держать горячим в течение всего рабочего дня, например, с 6 утра и до 17 часов, так как перезаливка может потребоваться в любое время.

При любом способе необходимо соблюдать следующие
принципы:

  1. Заливочный парафин должен быть нагрет на 5-6оС выше
    точки плавления парафина и при заливке он не должен
    застывать. При застывании и наливке остывшего парафина в
    нем образуются пузырьки воздуха.
  2. Ткань, подлежащая заливке, также не должна застывать и покрываться плёнкой.
  3. Заливать нужно с помощью горячего, но и не перегретого
    пинцета, чтобы не оставить ожоги на ткани.
  4. Пинцет необходимо протирать после каждого залитого объекта во избежании попадания микроскопических кусочков в другой блок. Бывает, невидимые глазу кусочки соскобов или плацент попадают в материал другого пациента, и патологам остаётся только гадать, откуда, например, в коже ворсины хориона.

5. Следует сперва наливать парафин в форму, а затем помещать в него кусочек ткани и ориентировать в форме так, как необходимо (об ориентации объектов расскажем в наших следующих выпусках).

6. При заливке формы не должны быть переполнены, но количество налитого парафина должно быть достаточным, чтобы блок удерживался на кассете во время микротомии.

7. Необходимо избегать механического травмирования
заливаемых объектов, они могут распадаться от сильного
нажатия.

8. При заливке вручную на верхнюю часть залитого блока
помещают номер. При заливке в аппарате, сверху заливочной
формы помещают маркированную кассету.

9. Дать остыть блоку. Чем блок больше и толще, тем дольше
он должен застывать.

10. По окончании работы с каждого рабочего место должны
быть убраны все остаки парафина и заливаемого материала, а ёмкости для расплавленного парафина должны быть наполнены.

Как понять, что блок застыл?

Парафин начинает застывать со всех краев одновременно, и происходит это
относительно быстро, за несколько минут. Но внутри он
застывает дольше, и длится этот процесс может от 20 минут до суток (в зависимости от состава парафина и размера блока).

Если после схватывания блока форму с залитым кусочком ткани из заливочного центра поместить в морозилку, то блок уже можно будет резать примерно через 1 час.

Из формы блок можно вынуть через несколько минут, парафин
на холоде сжимается и отскакивает от формы (обычно
раздается характерный щелчок; если блоков много — можно
услышать треск). Но это не значит, что блок готов к резке, его
нужно еще подержать в морозилке или на охлаждающей панели, желательно не менее часа.

Практические советы

При работе с большим количеством кассет обязательно нужно
соблюдать правило: открывать только одну кассету, заливать
только одну форму и следующую кассету брать в руки только
после сбрасывания крышки (при использовании заливочной станции) или всей кассеты (при ручном
методе, если лабораторию не обеспечивают кассетами и приходится их вторично использовать).

Чтобы уголки или формы не прилипали к поверхностям и друг другу, и от них легко отходил парафин, их нужно смазывать раствором этанола/глицерина 1/1, либо 4/1.

Пинцет также не должен остывать при заливке. Лучше всего пользоваться специальными пинцетами с электроподогревом. При их отуствии нагревать пинцет можно над пламенем спиртовки (не самый безопасный метод), нагревательных столиках, либо подогревать инструменты в специальных лунках заливочного центра.

Парафин для заливки лучше использовать тугоплавкий, 58-60оС, поскольку, чем парафин труднее плавится, тем он меньше нагревается в процессе микротомии, и с такого блока проще получить тонкий срез.

Продуктивность этапа

Средний уровень продуктивности на заливке равен 60 блоков/час. Он посчитан исходя из коэффициента использования рабочего времени 75% и эквивалентен различным уровням выхода: 90 блоков/2 часа и 180 блоков/4 часа.
Поскольку при заливке высокий уровень напряжения, то эта задача должна быть ограничена сменой, но не более 4 последовательных часов.
Поэтому рабочее место для заливки должно быть хорошо освещено, не быть на сквозняке или в холоде и оснащено удобными инструментами (пинцетами, прессами для придавливания материала к дну блока) и мебелью, позволяющей работать несколько часов непрерывно.

Меню