Сегодня мы поговорим об артефакте, с которым, наверное, многие сталкивались – это плохая депарафинизация срезов перед окрашиванием.
Как вы думаете, почему вообще может возникнуть такая проблема?
Варианты разные: грязные реагенты (ксилол), плохо протопленные стёкла, недостаточная обработка ткани на этапах фиксации и проводки… Но многие ли из нас задумывались о температуре в помещении во время окраски препаратов?
А ведь температура самым непосредственным образом влияет на скорость реакции (см. правило Вант-Гоффа http://ximik.biz/znamenitie-himiki.-nobelevskie-laure..). Если температура ниже, химические реакции замедляются.
Парафин становится более твёрдым при низких температурах (что следует из его физических свойств), а ксилол медленнее реагирует с ним при температуре ниже 20оС. На этом набито немало шишек, и причины тому – открытые окна, отключение отопления в холодное время года или яростные любители холода в помещении.
Кстати, по СанПиНу для комнат с медицинской техникой температура составляет 22-24оС в холодный период года и 21-23оС в тёплый период 😉
И всё же, если нормы по каким-либо причинам не были соблюдены, не всегда можно быстро нагреть помещение.
Некоторые лаборатории выходят из положения таким образом: используют подогрев ёмкостей с ксилолом (если такое предусмотрено в стейнере), или просто ставят закрытую бутыль с этим реактивом в термостат на ~полчаса при 37оС, а после используют для депарафинизации.
При таких условиях реакция протекает быстрее. Конечно, если ксилол не насыщен парафином.
Поэтому важно не только следить за температурой, но и вовремя менять реактивы. А так же периодически контролировать предыдущие этапы, потому что такие проблемы обычно комплексные.