Здравствуйте, коллеги! 👋🏻
С вами просветляющая рубрика «Образователь»😀😉

Часто те, кто используют изопропанол в проводке, задают вопрос: может ли дегидратант (изопропанол) заменить промежуточную среду, или просветлитель (ксилол, толуол, масло и т.д.)?
Отвечаем: не может. Функции у дегидратанта и просветлителя разные, а выполняют их вещества из совершенно разных химических классов. Промежуточная среда нужна не только для осуществления перехода между спиртом и парафином, основная её роль — просветление тканей, то есть подготовка их к пропитыванию парафином. Если ткани непросветлённые, они хуже пропитываются парафином, и возникают проблемы при резке. Особенно это заметно на жировой ткани.

Тем не менее, в некоторых лабораториях существует проводка изопропанол-парафин, и в этой статье мы приведём примеры такой проводки.

Проводка изопропанол-парафин

Большинство деликатных тканей удается провести таким способом и получить вполне пригодные для диагностики препараты. Это эндоскопические биоптаты, лимфоузлы, гинекологические соскобы, фрагменты слизистых оболочек, эмбрионы ранних сроков. Однако, очень часто получаются неудовлетворительные результаты для традиционно «трудных тканей», таких как жир, кишка, матка, кожа, опухоли из мышечной и соединительной ткани, кости. Поэтому прежде, чем запускать такой протокол в рутинную работу, проверьте, будет ли в ваших условиях достижим желаемый результат.

Изопропанол, в отличие от этанола, смешивается с парафином, поэтому многие считают, что промежуточная среда не нужна. Способность изопропанола смешиваться с расплавленным парафином известна благодаря тому, что при температуре выше 25оС он может находиться в области неполярных жидкостей, и благодаря этому хорошо смешивается с расплавленным парафином. Но здесь важно знать, что изопропанол никак не заменяет ксилол или любой другой просветлитель. Изопропанол удаляет из тканей воду, денатурирует большинство белков и растворяет большую часть жиров, но не просветляет ткани, так как его коэффициент преломления далек от ксилола и его аналогов.

Имеется два способа удаления изопропанола из тканей:
1. Увеличение температуры выше 65, вплоть до 82оС, выше начинается выкипание и испарение его из тканей и парафина, но такая температура ведёт к необратимому повреждению тканей.
2. Увеличение времени в расплавленном парафине. При таком способе удлиняется протокол проводки и время действия горячего парафина, что переуплотняет ткани.

Изопропанол на рынке зачастую продается под разными торговыми названиями. Торговые марки очень часто содержат более 96% изопропанола и малую часть различных добавок (неоинные ПАВ, метанол, высшие спирты), которые практически не влияют на качество проводки.

Варианты проводки на изопропанол-парафине

Эндоскопические биоптаты. Ручной метод

  1. Изопропанол 30 мин
    2. Изопропанол 30 мин
    3. Изопропанол 30 мин
    4. Парафин 30 мин
    5. Парафин 30 мин
    6. Парафин 30 мин

Хирургические образцы. Ручной метод

  1. Изопропанол 2 часа
    2. Изопропанол 2 часа
    3. Изопропанол 2 часа
    4. Изопропанол 2 часа
    5. Изопропанол 16 час (ночь или выходные)
    6. Парафин 2 часа
    7. Парафин 2 часа
    8. Парафин 2 часа

Эндоскопические биоптаты. Карусельный процессор. 1 корзина, 2 парафина

  1. Изопропанол 15 мин
    2. Изопропанол 15 мин
    3. Изопропанол 15 мин
    4. Изопропанол 15 мин
    5. Изопропанол 15 мин
    6. Парафин 1 час
    7. Парафин 1 час

Эндоскопические биоптаты. Карусельный процессор. 1 корзина, 3 парафина

  1. Изопропанол 15 мин
    2. Изопропанол 15 мин
    3. Изопропанол 15 мин
    4. Изопропанол 15 мин
    5. Изопропанол 15 мин
    6. Парафин 30 мин
    7. Парафин 1 час
    8. Парафин 1 час

Эндоскопические биоптаты. Карусельный процессор. 2 корзины, 2 парафина

  1. Изопропанол 15 мин
    2. Изопропанол 15 мин
    3. Изопропанол 15 мин
    4. Изопропанол 15 мин
    5. Изопропанол 15 мин
    6. Парафин 1 час
    7. Парафин 1 час (вторую корзину необходимо задержать дополнительно в парафине на 1 час)

Эндоскопические биоптаты. Карусельный процессор. 2 корзины, 3 парафина

  1. Изопропанол 15 мин
    2. Изопропанол 15 мин
    3. Изопропанол 15 мин
    4. Изопропанол 15 мин
    5. Изопропанол 15 мин
    6. Парафин 30 мин
    7. Парафин 1 час
    8. Парафин 1 час (вторую корзину необходимо держать дополнительно в парафине в течение 1 часа)

Хирургические образцы. Карусельный процессор. 1 корзина, 2 парафина

  1. Изопропанол 2 час
    2. Изопропанол 2 час
    3. Изопропанол 2 час
    4. Изопропанол 2 час
    5. Изопропанол 2 час
    6. Парафин 3 часа
    7. Парафин 3 часа

Хирургические образцы. Карусельный процессор. 1 корзина, 3 парафина

  1. Изопропанол 2 час
    2. Изопропанол 2 час
    3. Изопропанол 2 час
    4. Изопропанол 2 час
    5. Изопропанол 2 час
    6. Парафин 2 часа
    7. Парафин 2 часа
    8. Парафин 2 часа

Хирургические образцы. Карусельный процессор. 2 корзины, 2 парафина

  1. Изопропанол 2 час
    2. Изопропанол 2 час
    3. Изопропанол 2 час
    4. Изопропанол 2 час
    5. Изопропанол 2 час
    6. Парафин 3 часа
    7. Парафин 3 часа
    Вторую партию перед заливкой необходимо выдержать 3 часа во втором парафине.

Хирургические образцы. Карусельный процессор. 2 корзины, 3 парафина

  1. Изопропанол 2 час
    2. Изопропанол 2 час
    3. Изопропанол 2 час
    4. Изопропанол 2 час
    5. Изопропанол 2 час
    6. Парафин 2 часа
    7. Парафин 2 часа
    8. Парафин 2 часа

Вторую партию перед заливкой необходимо выдержать 2 часа в третьем парафине.

Вакуумный процессор. Эндоскопические биопсии

  1. Изопропанол 15 мин
    2. Изопропанол 15 мин
    3. Изопропанол 15 мин
    4. Изопропанол 15 мин
    5. Изопропанол 15 мин
    6. Парафин 20 мин
    7. Парафин 20 мин
    8. Парафин 20 мин

Вакуумный процессор. Хирургические образцы

  1. Изопропанол 1 час
    2. Изопропанол 1 час
    3. Изопропанол 2 часа
    4. Изопропанол 2 часа
    5. Изопропанол 2 часа
    6. Парафин 1.5 часа
    7. Парафин 2 часа
    8. Парафин 2 часа

Общие принципы смены реагентов

  1. После каждой проводки первый изопропанол выливается, остальные передвигаются на одну позицию влево (или вверх), последний – свежий.
  2. Парафин первый выливается 1 раз в неделю, остальные на одну позицию влево (или в верх), последний свежий.
  3. Парафин нужно менять, поскольку растворенные жиры не испаряются и не оседают на дно, как макроскопические загрязнения.

Надеемся, вам поможет эта информация в огранизации этапа проводки. Ещё больше способов проводки на разных реагентах вы найдёте на нашем сайте в рубрике «Образователь» https://histotechnology.ru/articles/obrazovatel/

Меню