Здравствуйте, коллеги! 🤚🏻

С вами снова рубрика «Образователь», и сегодня мы поговорим о ручной окраске H&E.
Тема эта была навеяна неприятным событием, которое случилось в одной из хорошо оборудованных лабораторий. Вы, наверное, уже догадались? Сломался гистостейнер, а.к.а красящий аппарат. 🤖
С этого дня и на протяжении всего периода починки, препараты красились вручную. При этом был использован протокол, адаптированный для автоматической окраски. Результаты должны были быть одинаковыми, но, видимо, что-то случилось… 🤷‍♀
После нескольких перекрашенных и недокрашенных партий (и жалоб врачей), было решено разобраться, наконец, в принципах окраски H&E.
В первую очередь, следует понимать, что при ручной окраске легче получить действительно хорошие и качественные результаты, потому что она поддаётся контролю.

✅Итак, окраску можно контролировать на любом этапе.
Это значит, что можно обнаружить любой «недокрас» или «перекрас», для этого нужно взять любое стекло из партии после красителя (не накрывая покровным стеклом), промыть его в дистиллированной воде и посмотреть его под микроскопом. Хватит даже 10-кратного увеличения. Если препараты перекрашены, нужно убрать избыток красителя в дифференцирующем растворе, если недокрашены — вернуть обратно в краситель, затем повторить этап окраски и дифференцировки.
Использование дифференцирующих растворов прощает нам ошибки передерживания стёкол в красителях, и позволяет получить более глубокую окраску структур с отмывкой после перекрашивания.
Для гематоксилина обычно используют 0,5%-1% соляную кислоту в 70% этаноле (стандартный солянокислый спирт). Чем меньше концентрация, тем дольше нужно держать стёкла, и тем легче контролировать процесс. Например, в 0,5% растворе это время составляет примерно 30-35 секунд.
Эозин дифференцируют в слегка подщелоченных растворах, например, в 2% растворе хлористого кальция в дистиллированной воде, или отмывка в 60% спирте. Можно воспользоваться обычной проточной водой, но времени уйдёт больше.

🖍Если в лаборатории нет дифференцирующих растворов, то используйте прогрессивные гематоксилины с более длительным временем окраски и водно-спиртовые или водные растворы эозина — их легче контролировать, не допуская перекрашивания.

🎨Результаты окрашивания H&E не должны варьировать в зависимости от используемых методов и красителей, и должны выглядеть так:
Ядра — синие
Фон — оттенки розового
Мышцы, коллаген — ярко-розовые
Эритроциты — оранжевые или красные
Лимфоциты — тёмно-синие или чёрные
Слизь (кислая) — синяя
Отложения кальция — чёрно-синие.
Окрашенные структуры из этого списка оцениваются под микроскопом, когда подбирается протокол окраски.
Здесь не принципиально, кто будет оценивать результаты. Не знаете, как выглядят структуры — найдите того, кто знает, попросите показать и запомните картинку.

🖍Производить контроль препаратов необходимо до заключения их под плёнку или стекло, потому что после этого сделать что-то с ними уже невозможно, и стёкла придётся переделывать. А если это гастробиоптат, в котором мало материала? На картинке ниже как раз показан такой случай. Это один и тот же препарат: на изображении слева он был некачественно покрашен, справа — перерезан и покрашен нормально.

Цените своё время, сохраняйте диагностический материал, контролируйте себя, обращайтесь к старшим коллегам. Если что-то остаётся непонятным или неразрешённым — пишите нам. Мы всегда на связи! 💌

Ваш Комитет лаборантов-гистологов Российского общества патологоанатомов.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Заполните поле
Заполните поле
Пожалуйста, введите корректный адрес email.

Меню