Окрашивать хеликобактеры можно разными способами:
гематоксилином, метиленовым (или толуидиновым) синим, серебрить по Warthin-Starry и даже антителами.

В рутинной практике просто, быстро и эффективно используется метиленовый синий Леффлера. Это доступный и относительно дешевый краситель.

При его использовании есть некоторые тонкости:

  1. Необходимо тщательное депарафинирование срезов, поскольку краситель не проникает в парафин.
  2. Время окраски может быть от 1 минуты до 10 или более. Перед красителем обязательно использовать чистую дистиллированную или деионизированную воду и стряхивать ее избыток со стекол — так продлевается жизнь красителя.
  3. После окраски смыть избыток окраски дистиллированной водой (проконтролировать картинку под микроскопом), промокнуть избыток воды и перенести стекла в ЧИСТЫЙ изопропиловый ( или 96-95% этиловый) спирт. Здесь извлекается избыток красителя. Если спирт загрязнен водой, будет извлекаться почти весь водорастворимый краситель.
  4. Перенести в 2 смены по 2 минуты чистого изопропанола (или 95% этанола). Спирт должен быть чистый. Загрязнённые спирты в итоговом препарате не уберут всю воду, и после ксилола в микроскопе ткани будут выглядеть как мутные/«посыпанные серым песком»/с крупными неопределенной формы черными пятнами.
  5. Перенести в ксилол.

Этанол подходит для обезвоживания хуже, чем изопропанол, потому что примесь воды извлекает краситель. Этанол изначально 96%, а изопропанол — 99,7%, соответственно, в нём меньше воды и краситель лучше сохраняет свои свойства.

Типичный артефакт для грязных спиртов и ксилолов после окраски — серая окантовка в клетках, особенно в тех, где много слизи. Это границы между водой, воздухом и ксилолом.
Кстати, подобный артефакт встречается при любой гистологической окраске.

Фотоматериалы с ru.wikipedia.org и лабораторий подписчиков сообщества Histotechnologyclub

Меню