Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии

info@histotechnology.ru
ВСТУПИТЬ В АССОЦИАЦИЮ
anti-Vimentin — Антитела к Виментину
I - Integrity - Целостность.
K - Knowledge - Знание.
O - Optimization - Оптимизация.
N - Necessity - Необходимость.
I.K.O.N. CONTROL · ПРОТОКОЛЫ К АНТИТЕЛАМ

При поддержке ООО «Рош Диагностика Рус».

anti-Vimentin

Антитела к Виментину. Практический протокол иммуногистохимического окрашивания, контроль качества и разбор типичных вариантов сигнала.

anti-Vimentin — иммуногистохимическое окрашивание ткани
Объект: ткани в парафиновом блоке

Что определяет anti-Vimentin

Антитело к Виментину (anti-Vimentin) вступает в реакцию с промежуточным филаментным белком — Виментином. Виментин экспрессируется во всех примитивных типах клеток, но в большинстве немезенхимальных клеток при дифференцировке он заменяется другими белками промежуточных филаментов. В гладкомышечных клетках сосудов виментин часто заменяется десмином. В поперечнополосатых мышцах виментин также заменяется десмином. Однако в процессе регенерации виментин экспрессируется снова. Виментин экспрессируется в самых разных типах клеток мезодермального происхождения.

Виментин-позитивны в здоровых тканях клетки мезенхимального происхождения: фибробласты, фиброциты, эндотелий, гладкомышечные клетки сосудов, стромальные клетки эндометрия; макрофаги, нейтрофилы, тромбоциты, дендритные клетки, клетки Лангерганса, меланоциты, лимфоциты, клетки Лейдига и Сертоли, миоэпителиальные клетки (молочных, слюнных и потовых желёз), поверхностный эпителий в яичниках, клетки капсулы Боумена почки; эпителий щитовидной железы, эпителий эндометрия, глиальные клетки.

Виментин-позитивные опухоли: фибросаркома, злокачественная фиброзная гистиоцитома, ангиосаркома, лейомиосаркома и рабдомиосаркома, а также лимфомы, меланомы и злокачественные шванномы — практически всегда экспрессируют виментин. Карциномы, происходящие из мезодермы, такие как почечно-клеточная карцинома, кортикальная карцинома надпочечников и аденокарциномы эндометрия и яичников, обычно экспрессируют виментин. Кроме того, виментином окрашиваются карциномы щитовидной железы. Виментином может быть окрашена любая низкодифференцированная или саркоматоидная карцинома.

Ключевой принцип: результат anti-Vimentin необходимо интерпретировать в контексте морфологии и остальных маркеров диагностической панели.
Объект исследования

Ткани в парафиновом блоке

Локализация окрашивания

Цитоплазма клеток

Оптимальный позитивный и негативный контроль

В качестве контрольных органов рекомендуются печень, аппендикс (толстая кишка) и поджелудочная железа. В печени протокол должен быть откалиброван таким образом, чтобы практически все клетки Купфера окрашивались интенсивно, в то время как эндотелиальные клетки синусоидов должны окрашиваться хотя бы слабо. Клетки печени должны быть негативными.

В толстой кишке рассеянные интраэпителиальные Т-клетки должны давать как минимум умеренную реакцию окрашивания. Эндотелиальные клетки крупных сосудов и стромальные клетки (например, фибробласты и лимфоциты) должны давать интенсивное, но отчётливое окрашивание цитоплазмы. Эпителиальные клетки слизистой оболочки толстой кишки должны давать отрицательный результат. В поджелудочной железе подавляющее большинство эпителиальных клеток экзокринных ацинусов должны давать слабую или сильную реакцию окрашивания преимущественно цитоплазмы (базо-латеральный паттерн окрашивания).

  • Поджелудочная железа + толстая кишка + печень — для рутинного протокола.
  • Поджелудочная железа + толстая кишка + почечно-клеточная карцинома + семинома + меланома — для валидации протокола исследования.
Ожидаемый паттерн окрашивания в валидационном мультиблоке:
  • Почечно-клеточная карцинома — выраженная цитоплазматическая реакция опухолевых клеток.
  • Семинома — выраженное цитоплазматическое окрашивание опухолевых клеток.
  • Меланома — выраженное цитоплазматическое окрашивание опухолевых клеток.
  • Эпителиальные клетки слизистой толстой кишки и гепатоциты — негативны.

Рекомендуемый протокол иммуногистохимического окрашивания

Первичное антитело

Параметр Dako/Agilent — Протокол A NeoMarkers — Протокол B
Клон3B4SP20
ПроизводительDako/AgilentNeoMarkers
№ продукта / № лотаM7020 / 20043919RM-9120-S / 9120S1702J
ФорматConcentrateConcentrate
ДилюентДаДа
Производитель дилюента / №Dako / K8006Immunologic / VWRKBD09-999
Разведение1:5001:200
Время инкубации / температура32 мин / 36 °C20 мин / 36 °C

Извлечение эпитопа, HIER

ПараметрDako/Agilent — Протокол ANeoMarkers — Протокол B
ПриборOn Board / On MachineOn Board / On Machine
БуферVentana CC1Ventana CC1
Время нагрева при макс. температуре48 мин64 мин
Максимальная температура нагрева99 °C95 °C

Система визуализации

ПараметрDako/Agilent — Протокол ANeoMarkers — Протокол B
ПроизводительVentanaVentana
Продукт / номерOptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700UltraView Universal DAB Detection Kit / 760-500
Время инкубации линкера8 мин—
Время инкубации полимера8 мин8 мин
Амплификатор—UltraView/iView Amplification Kit
Время инкубации амплификатора—8 мин
Температура инкубации36 °C36 °C

Хромоген

ПараметрDako/Agilent — Протокол ANeoMarkers — Протокол B
ПроизводительVentanaVentana
Продукт / номерOptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700UltraView Universal DAB Detection Kit / 760-500
Время инкубации / температура8 мин / 36 °C8 мин / 36 °C
УсилительCuSO₄CuSO₄

Иммуностейнер

ПараметрЗначение
ИммуностейнерVentana Benchmark Ultra

Разбор типичных вариантов сигнала

Сильный сигнал, фона нет

  • Следующим шагом является тестирование первичного антитела в многократных разведениях, чтобы получить наивысшее разведение с оптимальным результатом, сохранить первичное антитело и снизить затраты.

Сильный сигнал, слабый фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте окрашивание фона.

Сильный сигнал, сильный фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте окрашивание фона.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, фона нет

  • Увеличьте концентрацию первичных антител.
  • Увеличьте время инкубации первичного антитела.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, слабый фон

  • Увеличьте концентрацию первичных антител и сократите время инкубации.
  • Дальнейшее блокирование окрашивания фона.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Слабый сигнал, сильный фон

  • Дальнейшее блокирование окрашивания фона.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, фона нет

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, слабый фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, сильный фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.
Примечание

Ассоциация специалистов лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации (содержания и протоколов иммуногистохимического окрашивания), соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.

Авторы

Авторы и члены редакционного совета: Материал подготовлен экспертами Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии

Юнусов Теймур Юнусович

Юнусов Теймур Юнусович

Кандидат биологических наук, Президент Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Шилов Александр Викторович

Шилов Александр Викторович

Врач-патологоанатом, руководитель службы контроля качества патологоанатомических исследований, член президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Полина Ксения Константиновна

Полина Ксения Константиновна

Руководитель отдела контроля качества патологоанатомических исследований, член правления Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Вишнякова Виктория Владимировна

Вишнякова Виктория Владимировна

Медицинский технолог службы контроля качества патологоанатомических исследований, член Президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Литература

  1. Battifora H. Assessment of antigen damage in immunohistochemistry. The vimentin internal control. Am J Clin Pathol. 1991 Nov;96(5):669–71. doi: 10.1093/ajcp/96.5.669.
  2. Mahrle G, Bolling R, Osborn M, Weber K. Intermediate filaments of the vimentin and prekeratin type in human epidermis. J Invest Dermatol. 1983 Jul;81(1):46–8. doi: 10.1111/1523-1747.ep12538403.
  3. Azumi N, Battifora H. The distribution of vimentin and keratin in epithelial and nonepithelial neoplasms. A comprehensive immunohistochemical study on formalin- and alcohol-fixed tumors. Am J Clin Pathol. 1987;88:286–96.
  4. Battifora H. Assessment of antigen damage in immunohistochemistry. Am J Clin Pathol. 1991;88:669–71.
  5. Cote RJ, Cordon-Cardo C, Reuter VE, Rosen PP. Immunopathology of adrenal and renal cortical tumors. Coordinated change in antigen expression is associated with neoplastic conversion in the adrenal cortex. Am J Pathol. 1990 May;136(5):1077–84.
  6. Guan XY. Association of Vimentin overexpression and hepatocellular carcinoma metastasis. Oncogene. 2004 Jan 8;23(1):298–302.
  7. Khoury JD, Abrahams NA, Levin HS, MacLennan GT. The utility of epithelial membrane antigen and vimentin in the diagnosis of chromophobe renal cell carcinoma. Ann Diagn Pathol. 2002 Jun;6(3):154–8.
  8. Lang SH, Hyde C, Reid IN, Hitchcock IS, Hart CA, Bryden AA, Villette JM, Stower MJ, Maitland NJ. Enhanced expression of vimentin in motile prostate cell lines and in poorly differentiated and metastatic prostate carcinoma. Prostate. 2002 Sep 1;52(4):253–63.
  9. Niveditha SR, Bajaj P. Vimentin expression in breast carcinomas. Indian J Pathol Microbiol. 2003 Oct;46(4):579–84.
  10. Ramaekers FCS, Vroom TM, Moesker O, et al. The use of antibodies to intermediate filament proteins in the differential diagnosis of lymphoma versus metastatic carcinoma. Histochem J. 1985;17:57.
  11. Sembritzki O, Hagel C, Lamszus K, Deppert W, Bohn W. Cytoplasmic localization of wild-type p53 in glioblastomas correlates with expression of vimentin and glial fibrillary acidic protein. Neuro-oncol. 2002 Jul;4(3):171–8.
  12. Utsunomiya T, Yao T, Tamiya S, Tsuneyoshi M. Intracellular distribution of intermediate filaments in vimentin-positive gastric carcinomas: confocal laser scanning microscopy using formalin-fixed paraffin-embedded specimens. Pathol Res Pract. 2002;198(2):69–76.
  13. pathologyoutlines.com
  14. nordiqc.org