Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии

info@histotechnology.ru
ВСТУПИТЬ В АССОЦИАЦИЮ
anti-CK7 — Антитела к цитокератину 7
I - Integrity - Целостность.
K - Knowledge - Знание.
O - Optimization - Оптимизация.
N - Necessity - Необходимость.
I.K.O.N. CONTROL · ПРОТОКОЛЫ К АНТИТЕЛАМ

При поддержке ООО «Рош Диагностика Рус».

anti-CK7

Антитела к цитокератину 7 (Cytokeratin 7, K7). Практический протокол иммуногистохимического окрашивания, контроль качества и разбор типичных вариантов сигнала.

anti-CK7 — иммуногистохимическое окрашивание ткани
Объект: ткани в парафиновом блоке

Что определяет anti-CK7

Антитело к цитокератину 7 вступает в реакцию с нейтрально-щелочным промежуточным филаментным белком — цитокератином 7, который является структурой цитоскелета большинства эпителиальных клеток. Цитокератин 7 содержится в эпителии желудочно-кишечного тракта (кроме толстой кишки и аппендикса), желчных протоков, протоков поджелудочной железы, эпителии легочных альвеол, эпителии эндометрия, собирательных трубочек почек, фолликулах щитовидной железы, уротелии, секреторном эпителии молочной и слюнных желез.

Соответственно с помощью anti-CK7 можно отличить аденокарциномы, происходящие из данных локализаций, от карцином толстой кишки и предстательной железы. CK7-позитивны аденокарциномы лёгкого, карцинома молочной железы, мезотелиома, эндометриальная аденокарцинома, эндоцервикальная аденокарцинома, серозная карцинома яичника, тимома, панкреатическая/билиарная аденокарцинома, фиброламмелярный вариант гепатоцеллюлярного рака, карцинома тимуса, аденокарциномы верхнего отдела ЖКТ, уротелиальная карцинома, муциновая карцинома яичника, карциномы тонкой кишки, холангиокарцинома и аденокарцинома мочевого пузыря.

Ключевой принцип: anti-CK7 используется для подтверждения эпителиальной природы опухоли и в комбинации с CK20 позволяет разделять аденокарциномы по тканевому происхождению: CK7+/CK20− — лёгкое, молочная железа, эндометрий, поджелудочная железа, желчные протоки; CK7+/CK20+ — уротелиальная карцинома, муциновая карцинома яичника, карциномы верхних отделов ЖКТ; CK7−/CK20+ — колоректальная карцинома; CK7−/CK20− — карцинома предстательной железы, гепатоцеллюлярный рак, плоскоклеточная карцинома.
Объект исследования

Ткани в парафиновом блоке

Локализация окрашивания

Цитоплазма клеток

Оптимальный позитивный и негативный контроль

Оптимальный позитивный контроль: поджелудочная железа. Подавляющее большинство эпителиальных клеток вставочных протоков демонстрируют реакцию окрашивания цитоплазмы от слабой до умеренной, в то время как эпителиальные клетки крупных протоков поджелудочной железы окрашиваются интенсивно, а ацинарные клетки не окрашиваются.

Оптимальный негативный контроль: аппендикс можно использовать в качестве отрицательного тканевого контроля на CK7. В целом, в эпителиальных клетках не должно наблюдаться реакции окрашивания. Рассеянные столбчатые эпителиальные, рассеянные нейроэндокринные клетки и эндотелиальные клетки эндотелия могут демонстрировать слабую или умеренную реакцию окрашивания цитоплазмы.

  • Поджелудочная железа + аппендикс — для рутинного протокола.
  • Поджелудочная железа + аппендикс + аденокарцинома лёгкого, инвазивная карцинома молочной железы + аденокарцинома толстой кишки — для валидации протокола.
Ожидаемый паттерн окрашивания в валидационном мультиблоке:
  • Аденокарцинома лёгкого и инвазивная карцинома молочной железы — выраженное цитоплазматическое окрашивание подавляющего большинства опухолевых клеток.
  • Аденокарцинома толстой кишки — опухолевые клетки не окрашиваются или демонстрируют лишь фоновое окрашивание; служит отрицательным контролем.
  • Поджелудочная железа — вставочные протоки от слабого до умеренного цитоплазматического окрашивания, крупные протоки интенсивно, ацинусы негативны.
  • Аппендикс — эпителий негативен; рассеянные нейроэндокринные и эндотелиальные клетки могут быть слабо/умеренно позитивны.

Рекомендуемый протокол иммуногистохимического окрашивания

Первичное антитело

Параметр Dako / Agilent (OV-TL 12/30) Leica Biosystems (RN7) Ventana / Roche (SP52)
КлонOV-TL 12/30RN7SP52
ПроизводительDako / AgilentLeica BiosystemsVentana / Roche
№ продукта / № лотаIS619 / IR619 · 20075396PA0942 · 67746790-4462 · G14022
ФорматReady-To-Use (prediluted)Ready-To-Use (prediluted)Ready-To-Use (prediluted)
Время инкубации / температура20 мин / 20 °C15 мин / 36 °C16 мин / 36 °C

Извлечение эпитопа, HIER

ПараметрDako / AgilentLeica BiosystemsVentana / Roche
ПриборPT-link / PT-moduleOn Board / On MachineOn Board / On Machine
БуферDako TRS High pH (3-1)Leica Bond Epitope Retrieval Solution 2Ventana Ultra CC1
Время нагрева при макс. температуре20 мин20 мин64 мин
Максимальная температура нагрева97 °C100 °C95 °C

Система визуализации

ПараметрDakoLeicaVentana
ПроизводительDakoLeicaVentana
Продукт / номерEnVision FLEX+ / K8002 / SM802Bond Refine / DS9800UltraView Universal DAB Detection Kit / 760-500
Время инкубации линкера—8 мин—
Время инкубации полимера20 мин8 мин8 мин
Температура инкубации20 °C20 °C36 °C

Хромоген

ПараметрDakoLeicaVentana
ПроизводительDakoLeicaVentana
Продукт / номерDAB+ / DM827 / DM823 / K800Bond Refine / DS9800ultraView Universal DAB Detection Kit / 760-500
Время инкубации / температура10 мин / 20 °C0 мин / 20 °C8 мин / 36 °C
УсилительНетНетCuSO₄

Иммуностейнер

Dako Autostainer Link 48+—Ventana Benchmark Ultra

Разбор типичных вариантов сигнала

Сильный сигнал, фона нет

  • Следующим шагом протестируйте первичное антитело в серии разведений, чтобы получить наивысшее разведение с оптимальным результатом, сохранить реагент и снизить затраты.

Сильный сигнал, слабый фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте фоновое окрашивание.

Сильный сигнал, сильный фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте фоновое окрашивание.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, фона нет

  • Увеличьте концентрацию первичных антител.
  • Увеличьте время инкубации первичного антитела.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, слабый фон

  • Увеличьте концентрацию первичных антител и сократите время инкубации.
  • Усильте блокирование фонового окрашивания.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Слабый сигнал, сильный фон

  • Усильте блокирование фонового окрашивания.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, фона нет

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, слабый фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, сильный фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.
Примечание

Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации (содержание и протоколов иммуногистохимического окрашивания), соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.

Авторы

Авторы и члены редакционного совета: Материал подготовлен экспертами Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии

Юнусов Теймур Юнусович

Юнусов Теймур Юнусович

Кандидат биологических наук, Президент Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Шилов Александр Викторович

Шилов Александр Викторович

Врач-патологоанатом, руководитель службы контроля качества патологоанатомических исследований, член президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Полина Ксения Константиновна

Полина Ксения Константиновна

Руководитель отдела контроля качества патологоанатомических исследований, член правления Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Вишнякова Виктория Владимировна

Вишнякова Виктория Владимировна

Медицинский технолог службы контроля качества патологоанатомических исследований, член Президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Литература

  1. Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell. 1982;31:11–24.
  2. Chu PG, Weiss LM. Keratin expression in human tissues and neoplasms. Histopathology. 2002 May;40(5):403–39.
  3. Schweizer J, Bowden PE, Coulombe PA, Langbein L, Lane EB, Magin TM, Maltais L, Omary MB, Parry DA, Rogers MA, Wright MW. New consensus nomenclature for mammalian keratins. J Cell Biol. 2006 Jul 17;174(2):169–74.
  4. Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol. 2008 Jun;129(6):705–33.
  5. Chu PG, Lau SK, Weiss LM. Keratin expression in endocrine organs and their neoplasms. Endocr Pathol. 2009 Spring;20(1):1–10.
  6. Miettinen M, Fetsch JF. Distribution of keratins in normal endothelial cells and a spectrum of vascular tumors: implications in tumor diagnosis. Hum Pathol. 2000 Sep;31(9):1062–7.
  7. Skinnider BF, Folpe AL, Hennigar RA, Lim SD, Cohen C, Tamboli P, Young A, de Peralta-Venturina M, Amin MB. Distribution of cytokeratins and vimentin in adult renal neoplasms and normal renal tissue. potential utility of a cytokeratin antibody panel in the differential diagnosis of renal tumors. Am J Surg Pathol. 2005 Jun;29(6):747–54.
  8. Carrilho C, Alberto M, Buane L, David L. Keratins 8, 10, 13, and 17 are useful markers in the diagnosis of human cervix carcinomas. Hum Pathol. 2004 May;35(5):546–51.
  9. Smedts F, Ramaekers F, Robben H, Pruszczynski M, van Muijen G, Lane B, Leigh I, Vooijs P. Changing patterns of keratin expression during progression of cervical intraepithelial neoplasia. Am J Pathol. 1990 Mar;136(3):657–68.
  10. Matthias C, Mack B, Berghaus A, Gires O. Keratin 8 expression in head and neck epithelia. BMC Cancer. 2008 Sep 22;8:267.
  11. Böcker W, Hungermann D, Weigel S, Tio J, Decker T. Immunohistochemistry in breast pathology: differential diagnosis of epithelial breast lesions. Pathologe. 2009 Feb;30(1):13–9.
  12. Mackinder MA, Evans CA, Chowdry J, Staton CA, Corfe BM. Alteration in composition of keratin intermediate filaments in a model of breast cancer progression and the potential to reverse hallmarks of metastasis. Cancer Biomark. 2012;12(2):49–64.
  13. pathologyoutlines.com
  14. nordiqc.org