Червеобразный отросток, H&E (обзор). В червеобразном отростке
присутствуют все слои стенки, видны ганглионарные клетки. Покровный эпителий
и эпителий крипт сохранены, не разрушены и не десквамированы.
Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии
info@histotechnology.ru
I - Integrity - Целостность.
K - Knowledge - Знание.
O - Optimization - Оптимизация.
N - Necessity - Необходимость.
При поддержке ООО «Рош Диагностика Рус».
anti-CK20
Антитела к цитокератину 20. Практический протокол иммуногистохимического окрашивания, контроль качества и разбор типичных вариантов сигнала.
Что определяет anti-CK20
Антитело к цитокератину 20 (anti-CK20) вступает в реакцию с кислым промежуточным филаментным белком — цитокератином 20, который является структурой цитоскелета некоторых эпителиальных клеток. Цитокератин 20 содержится в эпителии желудочно-кишечного тракта (желудок, тонкая и толстая кишка (++)), зонтичных клетках уротелия (++), промежуточного эпителия уротелия (+), а также в клетках Меркеля, кортикотропных клетках аденогипофиза и рассеянных эндокринных клетках желудочно-кишечного тракта (+).
CK20-позитивны чаще всего колоректальные аденокарциномы (значительно реже — карциномы желудка и другие карциномы желудочно-кишечного тракта), карцинома Меркеля, а также некоторые панкреатобилиарные аденокарциномы, муцинозные опухоли яичника и лёгкого, уротелиальная карцинома.
CK20-негативны чаще всего карциномы шейки матки, эндометрия, яичника, простаты, пищевода, молочной железы, желчевыводящих путей, поджелудочной железы, почки, печени, щитовидной железы, слюнных желёз, надпочечника, герминогенные опухоли, нейроэндокринные опухоли ЖКТ и лёгкого, нейроэндокринные карциномы, плоскоклеточный рак лёгкого, мезотелиома, эпителиоидная саркома мягких тканей, тимус.
Ключевой принцип: результат anti-CK20 необходимо интерпретировать в
контексте морфологии и остальных маркеров диагностической панели.
Объект исследования
Ткани в парафиновом блоке
Локализация окрашивания
Цитоплазма клеток
Оптимальный позитивный и негативный контроль
В качестве положительного контроля для цитокератина 20 рекомендуется использовать стенку червеобразного отростка и толстой кишки. Все энтероциты, за исключением клеток базальных крипт, должны быть положительными. Отрицательными остаются клетки собственной пластинки слизистой, лимфоидные фолликулы, мышечная пластинка слизистой, мышечный слой и эндотелиальные клетки сосудов.
В качестве оптимального отрицательного тканевого контроля рекомендуется миндалина: все клетки многослойного плоского эпителия не должны демонстрировать окрашивания, лимфоциты и стромальные клетки также остаются негативными.
- Миндалина + аппендикс — для рутинного протокола.
- Миндалина + аппендикс + уротелиальная карцинома + инвазивная карцинома молочной железы + аденокарцинома толстой кишки — для валидации протокола исследования.
Ожидаемый паттерн окрашивания в валидационном мультиблоке:
- Аденокарцинома толстой кишки — сильное, чёткое цитоплазматическое окрашивание большинства опухолевых клеток.
- Уротелиальная карцинома — окрашивание зонтичных клеток от умеренного до сильного.
- Инвазивная карцинома молочной железы и миндалина — опухолевые/эпителиальные клетки не окрашиваются.
Примеры окрашивания
Каждое изображение можно заменить — для этого измените атрибут src у соответствующего тега <img>.
Червеобразный отросток, H&E (деталь). Лимфоидные узелки со
светлым герминативным центром, ганглионарные клетки присутствуют. Препарат
окрашен оптимально — отсутствуют признаки неравномерного окрашивания,
недостаточной фиксации и проводки.
Миндалина, H&E (обзор). В миндалине присутствует покровный
многослойный плоский эпителий и лимфоидные фолликулы со светлыми центрами.
Препарат окрашен оптимально.
Миндалина, H&E (деталь). Типичный диапазон окрашивания ядер:
мелкие лимфоциты имеют конденсированный хроматин, более крупные лимфоидные
клетки демонстрируют светлый хроматин, чёткие ядерные мембраны и
эозинофильные ядрышки.
Оптимальное окрашивание аппендикса на СК20. Практически все
поверхностные эпителиальные клетки демонстрируют сильную реакцию
цитоплазматического окрашивания, в то время как большинство клеток крипт
проявляют реакцию окрашивания от слабой до умеренной. Фоновой реакции
не наблюдается.
Недостаточное окрашивание аппендикса СК20. Показано большинство
поверхностных эпителиальных клеток, но интенсивность и количество окрашенных
клеток значительно снижены в основании крипт — протокол требует
оптимизации.
Рекомендуемый протокол иммуногистохимического окрашивания
Первичное антитело
| Параметр | Ventana — Протокол A | Ventana — Протокол B |
|---|---|---|
| Клон | SP33 | SP33 |
| Производитель | Ventana | Ventana |
| № продукта / № лота | 790-4431 / F13460 | 790-4431 / F13460 |
| Формат | Ready-To-Use (prediluted) | Ready-To-Use (prediluted) |
| Время инкубации / температура | 16 мин / 36 °C | 16 мин / 36 °C |
Извлечение эпитопа, HIER
| Параметр | Ventana — Протокол A | Ventana — Протокол B |
|---|---|---|
| Прибор | On Board / On Machine | On Board / On Machine |
| Буфер | Ventana Ultra CC1 | Ventana Ultra CC1 |
| Время нагрева при макс. температуре | 64 мин | 64 мин |
| Максимальная температура нагрева | 100 °C | 95 °C |
Система визуализации
| Параметр | Ventana — Протокол A | Ventana — Протокол B |
|---|---|---|
| Производитель | Ventana | Ventana |
| Продукт / номер | OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700 | UltraView Universal DAB Detection Kit / 760-500 |
| Инкубация линкера | 8 мин | — |
| Инкубация полимера | 8 мин | 8 мин |
| Температура инкубации | 36 °C | 36 °C |
Хромоген
| Параметр | Ventana — Протокол A | Ventana — Протокол B |
|---|---|---|
| Производитель | Ventana | Ventana |
| Продукт / номер | OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700 | UltraView Universal DAB Detection Kit / 760-500 |
| Время инкубации / температура | 8 мин / 36 °C | 8 мин / 36 °C |
| Усилитель | CuSO₄ | — |
Иммуностейнер
| Параметр | Значение |
|---|---|
| Иммуностейнер | Ventana Benchmark Ultra |
Разбор типичных вариантов сигнала
Сильный сигнал, фона нет
- Тестируйте первичное антитело в серии разведений — выберите наивысшее разведение с оптимальным результатом.
Сильный сигнал, слабый фон
- Уменьшите концентрацию первичных антител.
- Сократите время инкубации первичных и вторичных антител.
- Дополнительно заблокируйте фоновое окрашивание.
Сильный сигнал, сильный фон
- Уменьшите концентрацию первичных антител.
- Сократите время инкубации первичных и вторичных антител.
- Заблокируйте фон, попробуйте другой метод поиска антигена.
Слабый сигнал, фона нет
- Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
- Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
- Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
Слабый сигнал, слабый фон
- Увеличьте концентрацию первичных антител, сократите время инкубации.
- Усильте блокирование фона.
- Используйте более чувствительную систему детекции или другое первичное антитело.
Слабый сигнал, сильный фон
- Усильте блокирование фона.
- Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
- Попробуйте другой метод поиска антигена или другое первичное антитело.
Сигнала нет, фона нет
- Следуйте общим подходам шаг за шагом.
- Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
- Попробуйте другой метод поиска антигена и более чувствительную систему детекции.
- Обратитесь в техническую поддержку поставщика.
Сигнала нет, слабый фон
- Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
- Попробуйте другой метод поиска антигена.
- Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
- Обратитесь в техподдержку поставщика.
Сигнала нет, сильный фон
- Попробуйте другой метод поиска антигена.
- Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
- Обратитесь в техподдержку поставщика антител.
- Используйте другое первичное антитело.
Примечание
Ассоциация специалистов лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации (содержания и протоколов иммуногистохимического окрашивания), соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.
Авторы
Литература
- Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell. 1982;31:11–24.
- Chu PG, Weiss LM. Keratin expression in human tissues and neoplasms. Histopathology. 2002;40(5):403–39.
- Schweizer J, Bowden PE, Coulombe PA, et al. New consensus nomenclature for mammalian keratins. J Cell Biol. 2006;174(2):169–74.
- Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol. 2008;129(6):705–33.
- Chu PG, Lau SK, Weiss LM. Keratin expression in endocrine organs and their neoplasms. Endocr Pathol. 2009;20(1):1–10.
- Miettinen M, Fetsch JF. Distribution of keratins in normal endothelial cells and a spectrum of vascular tumors. Hum Pathol. 2000;31(9):1062–7.
- Skinnider BF, Folpe AL, Hennigar RA, et al. Distribution of cytokeratins and vimentin in adult renal neoplasms and normal renal tissue. Am J Surg Pathol. 2005;29(6):747–54.
- Carrilho C, Alberto M, Buane L, David L. Keratins 8, 10, 13, and 17 are useful markers in the diagnosis of human cervix carcinomas. Hum Pathol. 2004;35(5):546–51.
- Smedts F, Ramaekers F, Robben H, et al. Changing patterns of keratin expression during progression of cervical intraepithelial neoplasia. Am J Pathol. 1990;136(3):657–68.
- Matthias C, Mack B, Berghaus A, Gires O. Keratin 8 expression in head and neck epithelia. BMC Cancer. 2008;8:267.
- Böcker W, Hungermann D, Weigel S, Tio J, Decker T. Immunohistochemistry in breast pathology. Pathologe. 2009;30(1):13–9.
- Mackinder MA, Evans CA, Chowdry J, et al. Alteration in composition of keratin intermediate filaments in a model of breast cancer progression. Cancer Biomark. 2012;12(2):49–64.
- pathologyoutlines.com
- nordiqc.org