Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии

info@histotechnology.ru
ВСТУПИТЬ В АССОЦИАЦИЮ
anti-CDX2 — Антитела к гомеобоксному транскрипционному фактору CDX2
I - Integrity - Целостность.
K - Knowledge - Знание.
O - Optimization - Оптимизация.
N - Necessity - Необходимость.
I.K.O.N. CONTROL · ПРОТОКОЛЫ К АНТИТЕЛАМ

При поддержке ООО «Рош Диагностика Рус».

anti-CDX2

Антитела к гомеобоксному транскрипционному фактору CDX2 (Caudal-Type Homeobox 2). Практический протокол иммуногистохимического окрашивания, контроль качества и разбор типичных вариантов сигнала.

anti-CDX2 — иммуногистохимическое окрашивание ткани
Объект: ткани в парафиновом блоке

Что определяет anti-CDX2

Антитело к CDX2 (anti-CDX2) вступает в реакцию с гомеобоксным транскрипционным фактором семейства ParaHox, кодируемым геном CDX2 на хромосоме 13q12.2. Он действует как фактор, определяющий клеточную линию кишечного эпителия (от двенадцатиперстной до толстой кишки), запуская и поддерживая программы дифференцировки кишечного эпителия. CDX2 необходим для развития кишечника, формирования фенотипа кишечных клеток и поддержания идентичности эпителия кишечника у взрослых особей. Он регулирует пролиферацию и дифференцировку кишечных эпителиальных клеток. В физиологических условиях CDX2 активно экспрессируется в ядре клеток нормального эпителия тонкого и толстого кишечника, но отсутствует в большинстве других эпителиев.

CDX2-позитивны в норме: ядра кишечного эпителия, выстилающего ворсинки и крипты толстой кишки, эпителий протоков поджелудочной железы, некоторый эпителий желудка, пищевода.

CDX2-позитивны следующие опухоли: аденокарцинома мочевого пузыря, уротелиальная карцинома in situ с железистой дифференцировкой, колоректальные аденокарциномы (86–100 %, реже при низкой дифференцировке), карцинома внепечёночных желчных протоков (37 %), аденокарцинома желудка (36–70 %, с переменной интенсивностью), карциномы тонкой кишки (60 %), нейроэндокринные опухоли аппендикса, подвздошной кишки, поджелудочной железы, перстневидно-клеточная карцинома толстой кишки (сильная, диффузная) и желудка (слабая, неоднородная), муцинозные аденокарциномы лёгких и яичников.

CDX2-позитивны следующие неопухолевые процессы: кишечная метаплазия мочевого пузыря, кишечная метаплазия пищевода Барретта, метапластический цилиндрический эпителий пищевода без бокаловидных клеток, гиперпластические полипы толстой кишки.

Ключевой принцип: anti-CDX2 применяется как маркер кишечной дифференцировки и интерпретируется в связке с маркерами других линий (CK7, CK20, villin, SATB2) для разграничения первичных и метастатических аденокарцином.
Объект исследования

Ткани в парафиновом блоке

Локализация окрашивания

Ядро клеток

Оптимальный позитивный и негативный контроль

Оптимальная позитивная контрольная ткань — поджелудочная железа. Практически все эпителиальные клетки протоков и вставочных протоков должны демонстрировать реакцию окрашивания от слабой до умеренной, с чётким окрашиванием ядер.

Оптимальная негативная контрольная ткань — миндалина. Эндотелиальные клетки и клетки гладких мышц, лимфоциты не окрашиваются, хотя в отдельных лимфоцитах иногда может наблюдаться слабое ядерное окрашивание.

  • Миндалина + поджелудочная железа — для рутинного протокола.
  • Миндалина + аппендикс + поджелудочная железа + аденокарцинома лёгкого + аденокарцинома толстой кишки — для валидации протокола.
Ожидаемый паттерн окрашивания в валидационном мультиблоке:
  • Поджелудочная железа и аппендикс — служат внутренним позитивным контролем: ядра эпителиальных клеток протоков и крипт должны быть чётко окрашены.
  • Миндалина — служит негативным контролем: лимфоциты не должны окрашиваться (допускается слабое ядерное окрашивание в единичных клетках).
  • Аденокарцинома толстой кишки — выраженное чёткое ядерное окрашивание подавляющего большинства опухолевых клеток.
  • Аденокарцинома лёгкого — опухолевые клетки, как правило, не окрашиваются или демонстрируют слабую/очаговую реакцию; реакция ограничена отдельными ядрами.

Рекомендуемый протокол иммуногистохимического окрашивания

Первичное антитело

Параметр Ventana / Roche (EPR2764Y) Cell Marque (EPR2764Y) Cell Marque (EPR2764Y)
КлонEPR2764YEPR2764YEPR2764Y
ПроизводительVentana / RocheCell MarqueCell Marque
№ продукта / № лота760-4380 / V0002151235-Rxx / V0002153235R-14, -15 или -16 / 67446
ФорматReady-To-Use (prediluted)Ready-To-Use (prediluted)Concentrate
Дилюент (разбавитель)не требуетсяне требуетсяДа
Титр разведения——1:400
Время инкубации / температура32 мин / 36 °C16 мин / 36 °C32 мин / 36 °C

Извлечение эпитопа, HIER

ПараметрVentana / RocheCell Marque (RTU)Cell Marque (Concentrate)
ПриборOn Board / On MachineOn Board / On MachineOn Board / On Machine
БуферVentana Ultra CC1Ventana Ultra CC1Ventana CC1
Время нагрева при макс. температуре64 мин32 мин48 мин
Максимальная температура нагрева95 °C100 °C99 °C

Система визуализации

ПараметрVentana / RocheCell Marque (RTU)Cell Marque (Concentrate)
ПроизводительVentanaVentanaVentana
Продукт / номерUltraView Universal DAB Detection Kit / 760-500OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700
Время инкубации линкера—8 мин8 мин
Время инкубации полимера8 мин8 мин8 мин
Температура инкубации36 °C36 °C36 °C

Хромоген

ПараметрVentana / RocheCell Marque (RTU)Cell Marque (Concentrate)
ПроизводительVentanaVentanaVentana
Продукт / номерUltraView Universal DAB Detection Kit / 760-500OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700
Время инкубации / температура8 мин / 36 °C8 мин / 36 °C8 мин / 36 °C
УсилительCuSO₄CuSO₄CuSO₄

Иммуностейнер

Ventana Benchmark UltraVentana Benchmark UltraVentana Benchmark Ultra

Разбор типичных вариантов сигнала

Сильный сигнал, фона нет

  • Следующим шагом является тестирование первичного антитела в многократных разведениях, чтобы получить наивысшее разведение с оптимальным результатом, сохранить первичное антитело и снизить затраты.

Сильный сигнал, слабый фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте окрашивание фона.

Сильный сигнал, сильный фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте окрашивание фона.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, фона нет

  • Увеличьте концентрацию первичных антител.
  • Увеличьте время инкубации первичного антитела.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, слабый фон

  • Увеличьте концентрацию первичных антител и сократите время инкубации.
  • Дальнейшее блокирование окрашивания фона.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Слабый сигнал, сильный фон

  • Дальнейшее блокирование окрашивания фона.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, фона нет

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, слабый фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, сильный фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.
Примечание

Ассоциация специалистов лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации (содержание и протоколов иммуногистохимического окрашивания), соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.

Авторы

Авторы и члены редакционного совета: Материал подготовлен экспертами Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии

Юнусов Теймур Юнусович

Юнусов Теймур Юнусович

Кандидат биологических наук, Президент Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Шилов Александр Викторович

Шилов Александр Викторович

Врач-патологоанатом, руководитель службы контроля качества патологоанатомических исследований, член президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Полина Ксения Константиновна

Полина Ксения Константиновна

Руководитель отдела контроля качества патологоанатомических исследований, член правления Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Вишнякова Виктория Владимировна

Вишнякова Виктория Владимировна

Медицинский технолог службы контроля качества патологоанатомических исследований, член Президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Литература

  1. Wu JM, Montgomery EA, Iacobuzio-Donahue CA. Frequent beta-catenin nuclear labeling in sessile serrated polyps of the colorectum with neoplastic potential. Am J Clin Pathol. 2008 Mar;129(3):416–23. doi: 10.1309/603UQKM7C2KELGJU.
  2. Groisman GM, Bernheim J, Halpern M, Brazowsky E, Meir A. Expression of the intestinal marker Cdx2 in secondary adenocarcinomas of the colorectum. Arch Pathol Lab Med. 2005 Jul;129(7):920–3. doi: 10.5858/2005-129-920-EOTIMC.
  3. Suh N, Yang XJ, Tretiakova MS, Humphrey PA, Wang HL. Value of CDX2, villin, and alpha-methylacyl coenzyme A racemase immunostains in the distinction between primary adenocarcinoma of the bladder and secondary colorectal adenocarcinoma. Mod Pathol. 2005 Sep;18(9):1217–22. doi: 10.1038/modpathol.3800407.
  4. Saad RS, Cho P, Silverman JF, Liu Y. Usefulness of Cdx2 in separating mucinous bronchioloalveolar adenocarcinoma of the lung from metastatic mucinous colorectal adenocarcinoma. Am J Clin Pathol. 2004 Sep;122(3):421–7. doi: 10.1309/UMF7-15KR-G2V1-98YD.
  5. Werling RW, Yaziji H, Bacchi CE, Gown AM. CDX2, a highly sensitive and specific marker of adenocarcinomas of intestinal origin: an immunohistochemical survey of 476 primary and metastatic carcinomas. Am J Surg Pathol. 2003 Mar;27(3):303–10. doi: 10.1097/00000478-200303000-00003.
  6. pathologyoutlines.com
  7. nordiqc.org