Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии

info@histotechnology.ru
ВСТУПИТЬ В АССОЦИАЦИЮ
anti-TTF-1 — Антитела к тиреоидному фактору транскрипции 1 (NKX2-1)
I - Integrity - Целостность.
K - Knowledge - Знание.
O - Optimization - Оптимизация.
N - Necessity - Необходимость.
I.K.O.N. CONTROL · ПРОТОКОЛЫ К АНТИТЕЛАМ

При поддержке ООО «Рош Диагностика Рус».

anti-TTF-1

Антитела к тиреоидному фактору транскрипции 1 (TTF-1, NKX2-1). Практический протокол иммуногистохимического окрашивания, контроль качества и разбор типичных вариантов сигнала.

anti-TTF-1 — иммуногистохимическое окрашивание ткани
Объект: ткани в парафиновом блоке

Что определяет anti-TTF-1

Антитело к TTF-1 (anti-TTF1) вступает в реакцию фактором транскрипции NKX2-1. TTF-1 высокоспецифичен для фолликулярного эпителия щитовидной железы и альвеолярного эпителия лёгких. Маркер играет ключевую роль в тканеспецифической экспрессии генов тиреоглобулина и сурфактантных белков, а также участвует в морфогенезе лёгких и щитовидной железы.

Данный маркер может быть спользован для диагностики аденокарциномы лёгкого и образований щитовидной железы. Слабое фокальное окрашивание может встречаться в аденокарциномах других локализаций, чаще верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Кроме того, TTF-1 позитивен в мелкоклеточных нейроэндокринных карциномах различных локализаций, в том числе экстрапульмонарных.

TTF-1-позитивны: аденокарцинма лёгких, мелкоклеточный рак лёгких, карциноидная опухоль, новообразования щитовидной железы, мультиформная глиобластома, хордоидные глиомы, питуицитома, веретеноклеточная онкоцитома, зернистоклеточная опухоль, эпендимома третьего желудочка, субэпендимальная гигантоклеточная астроцитома.

Ключевой принцп: anti-TTF-1 применяется как высокоспецифичный маркер для подтверждения лёгочной или тиреоидной природы новообразования и интерпретируется в связке с другими маркерами (CK7, Napsin A, PAX8, тиреоглобулин и др.).
Объект исследования

Ткани в парафиновом блоке

Локализация окрашивания

Ядро клеток

Оптимальный позитивный и негативный контроль

В качестве оптимального пложительного контроля рекомендуется использовать нормальную лёгочную ткань. Столбчатые эпителиальные клетки терминальных бронхиол слабо экспрессируют TTF-1, демонстрируя реакцию ядерного окрашивания от умеренной до сильной. Пневмоциты II типа, клетки Клара и базальные клетки терминальных бронхиол являются «высокоэкспрессирующими» клетками, в которых наблюдается сильная реакция ядерного окрашивания.

Нейроэндокринные опухоли лёгких, которые обычно экспрессируют низкий уровень TTF-1, также следует включать в качестве положительного контроля при первоначальной проверке протокола TTF-1. Это позволяет оценить чувствительность протокола в диапазоне низкой экспрессии. Щитовидная железа менее надёжна в качестве положительного тканевого контроля для TTF-1, так как эпителиальные клетки щитовидной железы экспрессируют очень высокий уровень TTF-1, что затрудняет оценку чувствительности используемого протокола.

Печень можно использовать в качестве отрицательного контроля, но при использовании mAb 8G7G3/1 необходимо учитвать цитоплазматическое окрашивание гепатоцитов. При оценке следует обращать внимание на чисто ядерный паттерн сигнала в положительных контрольных тканях.

  • Лёгкое + печень — для рутинного протокола.
  • Лёгке + нейроэндокринная опухоль лёгкого + печень + щитовидная железа — для валидации протокола исследования.
Ожидаемый паттерн окрашивания в алидационном мультиблоке:
  • Лёгочная ткань — пневмоциты II типа, клетки Клара и базальные клетки терминальных бронхиол демонстрируют выраженную ядерную реакцию; столбчатые эпителиальные клетки — слабую или умеренную.
  • Нейроэндокринная опухоль лёгкого — слабая или умеренная ядерная реакция в опухолевых клетках.
  • Печень — отсутствие ядерного окрашивания и фонового окрашивания (с учётом возможной цитоплазматической реакции при использовании mAb 8G7G3/1).
  • Щитовидная железа — служит дополнительным контролем: фолликулярные эпителиальные клетки должны быть ярко яерно-позитивны.

Рекомендуемый протокол иммуногистохимического окрашивания

Первичное антитело

Параметр Ventana (SP141)
КлонSP141
ПроизводительVentana
№ продукта / № лота790-4756 / unknown
ФорматReady-To-Use (prediluted)
Время инкубации / температура12 мин / 36 °C

Извлечение эпитопа, HIER

ПараметрVentana (SP141)
ПриборOn Board / On Machine
БуферVentana Ultra CC1
Время нагрева при макс. температуре64 мин
Максимальная температура нагрева95 °C

Система визуализации

ПараметрVentana (SP141)
ПроизводительVentana
Продукт / номерOptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700
Инкубация линкера8 мин
Инкубация полимера8 мин
Температура инкубации36 °C

Хромоген

ПараметрVentana (SP141)
ПроизводительVentana
Продукт / номерOptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700
Время инкубации / температура8 мин / 36 °C
УсилительНет

Иммуностейнер

Ventana Benchmark Ultra

Разбор типичных вариантов сигнала

Сильный сигнал, фона нет

  • Следующим шагом протестируйте первичное антитело в серии разведений, чтобы получить наивысшее разведение с оптимальным результатом, сохранить реагент и снизить затраты.

Сильный сигнал, слабый фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте фоновое окрашивание.

Сильный сигнал, сильный фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте фоновое окрашивание.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, фона нет

  • Увеличьте концентрацию первичных антител.
  • Увеличьте время инкубации первичного антитела.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, слабый фон

  • Увеличьте концентрацию первичных антител и сократите время инкубации.
  • Усильте блокирование фонового окрашивания.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Слабый сигнал, сильный фон

  • Усильте блокирование фонового окрашивания.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, фона нет

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, слабый фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, сильный фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.
Примечание

Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации (содержание и протоколов иммуногистохимического окрашивания), соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.

Авторы

Авторы и члены редакционного совета: Материал подготовлен экспертами Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии

Юнусов Теймур Юнусович

Юнусов Теймур Юнусович

Кандидат биологических наук, Президент Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Шилов Александр Викторович

Шилов Александр Викторович

Врач-патологоанатом, руководитель службы контроля качества патологоанатомических исследований, член президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Полина Ксения Константиновна

Полина Ксения Константиновна

Руководитель отдела контроля качества патологоанатомических исследований, член правления Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Вишнякова Виктория Владимировна

Вишнякова Виктория Владимировна

Медицинский технолог службы контроля качества патологоанатомических исследований, член Президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Литература

  1. Agoff SN, Lamps LW, Philip AT, et al. Thyroid transcription factor-1 is expressed in extrapulmonary small cell carcinomas but not in other extrapulmonary neuroendocrine tumors. Mod Pathol 2000;13:238–242.
  2. Bingle CD. Thyroid transcription factor-1. Int J Biochem Cell Biol 1997;29:1471–1473.
  3. Civitareale D, Lonigro R, Sinclair AJ et al. A thyroid-specific nuclear protein essential for tissue-specific expression of the thyroglobulin promoter. EMBO J 1989;8:2537–2542.
  4. Comperat E, Zhang F, Perrotin C, Molina T, Magdeleinat P, Marmey B, Regnard JF, Audouin J, Camilleri-Broet S. Variable sensitivity and specificity of TTF-1 antibodies in lung metastatic adenocarcinoma of colorectal origin. Mod Pathol. 2005 Oct;18(10):1371–6.
  5. Holzinger A, Dingle S, Bejarano PA, et al. Monoclonal antibody to thyroid transcription factor-1: Production, characterization and usefulness in tumor diagnosis. Hybridoma 1996;15:49–53.
  6. Katoh R, Myiagi E, Nakamura N, et al. Expression of thyroid transcription factor-1 (TTF-1) in human C cells and medullary thyroid carcinomas. Hum Pathol 2000;31:386–393.
  7. Lau SK, Luthringer DJ, Eisen RN. Thyroid transcription factor-1: A review. AIMM 2002;10:97–102.
  8. Oliveira AM, Tazelaar HD, Myers JL, et al. Thyroid transcription factor-1 distinguishes metastatic pulmonary from well-differentiated neuroendocrine tumors of other sites. Am J Surg Pathol 2001;25:815–819.
  9. Ordonez NG. Value of thyroid transcription factor-1 immunostaining in distinguishing small cell lung carcinomas from other small cell carcinomas. Am J Surg Pathol. 2000;24:1217–1223.
  10. Pang Y, von Turkovich M, Wu H, Mitchell J, Mount S, Taatjes D, Cooper K. The binding of thyroid transcription factor-1 and hepatocyte paraffin 1 to mitochondrial proteins in hepatocytes: a molecular and immunoelectron microscopic study. Am J Clin Pathol. 2006 May;125(5):722–6.
  11. Pelosi G, Fraggetta F, Pasini F, et al. Immunoreactivity for thyroid transcription factor-1 in stage I non-small cell carcinomas of the lung. Am J Surg Pathol 2001;25:363–372.
  12. Penman D, Downie I, Roberts F. Positive immunostaining for thyroid transcription factor-1 in primary and metastatic colonic adenocarcinoma: a note of caution. J Clin Pathol. 2006 Jun;59(6):663–4.
  13. Wieczorek TJ, Pinkus JL, Glikman JN, et al. Comparison of thyroid transcription factor-1 and hepatocyte antigen immunohistochemical analysis in the differential diagnosis of hepatocellular carcinoma, renal cell carcinoma, and adrenal cortical carcinoma. Am J Clin Pathol 2002;118:911–921.