anti-p40 — Антитела к ядерному маркёру p63 (плоскоклеточная / уротелиальная / базальная дифференцировка)
I - Integrity - Целостность.
K - Knowledge - Знание.
O - Optimization - Оптимизация.
N - Necessity - Необходимость.
I.K.O.N. CONTROL · ПРОТОКОЛЫ К АНТИТЕЛАМ

При поддержке ООО «Рош Диагностика Рус».

anti-p40

Антитела к p40 — изоформе ΔN белка p63, ядерному маркёру плоскоклеточной, уротелиальной и миоэпителиальной/базальной дифференцировки. Практический протокол иммуногистохимического окрашивания, контроль качества и разбор типичных вариантов сигнала.

anti-p40 — иммуногистохимическое окрашивание плоского эпителия
Объект: ткани в парафиновом блоке

Что определяет anti-p40

Anti-p40 — это антитело изначально к домену ΔN белка p63, но сейчас просто к белку p63. Белок p63 (p63) — ядерный белок, фактор транскрипции. Ген p63 расположен на хромосоме 3q27-29 и принадлежит к семейству генов p53. p63 играет важнейшую роль в росте и развитии многих эпителиальных органов. p63 экспрессируется в базальных клетках плоского эпителия (включая эпидермис и волосяные фолликулы) и уротелия, а также в базальных клетках/миоэпителиальных клетках молочных желёз, потовых желёз, слюнных желёз и предстательной железы. p63 существует в двух изоформах: TAp63, которая является супрессором опухолевого роста, подобным p53, и ΔNp63, которая является онкогеном.

Ядерный маркер, экспрессирующийся при дифференцировке плоскоклеточных, уротелиальных, миоэпителиальных/базальных клеток. При карциномах белок p40 обладает примерно такой же чувствительностью, как и p63, но более высокой специфичностью, поскольку изоформа TAp63 более широко распространена, например, при аденокарциномах. Кроме того, p63 встречается в лимфомах, которые не экспрессируют p40.

p40-позитивен: плоскоклеточный рак любой локализации, аденоплоскоклеточный рак лёгкого, аденокистозная карцинома слюнной железы, базальноклеточная карцинома, уротелиальная карцинома, тимома, хориокарцинома, метапластический рак молочной железы, Юинг/ПНЭТ, мультифенотипическая синоназальная карцинома, рак носоглотки, карцинома NUT, обонятельная нейробластома, синоназальный недифференцированный рак.

Ключевой принцип: anti-p40 применяется как ядерный маркёр плоскоклеточной, уротелиальной и миоэпителиальной/базальной дифференцировки. По сравнению с p63 обладает более высокой специфичностью при той же чувствительности, что делает его предпочтительным инструментом при разграничении плоскоклеточного рака и аденокарциномы, а также при оценке базального слоя простаты, молочной и слюнной желёз.
Объект исследования

Ткани в парафиновом блоке

Локализация окрашивания

Ядро клеток

Оптимальный позитивный и негативный контроль

Плацента рекомендуется в качестве положительного тканевого контроля для p40, при этом должна наблюдаться отчётливая реакция цитотрофобластов на окрашивание, от слабой до умеренной. Цитотрофобласты должны быть видны даже при малом увеличении (объектив 5×).

В качестве положительного тканевого контроля можно использовать миндалину. Практически все клетки плоского эпителия должны демонстрировать отчётливую реакцию на окрашивание, от умеренной до сильной. В других типах клеток реакция на окрашивание в ядре или цитоплазме отсутствует.

Миндалина может служить отрицательным тканевым контролем. В миндалине подавляющее большинство лимфоцитов должны быть отрицательными. При правильно валидированном иммуногистохимическом протоколе цитотрофобласты в плаценте дают слабую или умеренную, но отчётливую ядерную реакцию, видимую уже при малом увеличении, а клетки плоского эпителия миндалины — умеренное или сильное ядерное окрашивание.

  • Плацента + миндалина — для рутинного исследования.
  • Плацента + миндалина + аденокарцинома лёгкого + плоскоклеточная карцинома лёгкого — для валидации протокола.
  • Молочная или предстательная железа или шейка + толстая кишка — дополнительный контроль.
Ожидаемый паттерн окрашивания в валидационном мультиблоке:
  • Плацента — рассеянные цитотрофобласты демонстрируют слабую или умеренную ядерную реакцию, отчётливо видимую при малом увеличении (×5); фон отсутствует.
  • Миндалина — практически все клетки покровного плоского эпителия демонстрируют умеренную или сильную ядерную реакцию; лимфоциты негативны.
  • Аденокарцинома лёгкого — негативна по p40 (за исключением редких случаев с аберрантной экспрессией).
  • Плоскоклеточная карцинома лёгкого — яркая ядерная реакция в подавляющем большинстве опухолевых клеток.
  • Молочная/предстательная железа или шейка матки — позитивны ядра базальных/миоэпителиальных клеток; просветные эпителиальные клетки негативны. Толстая кишка служит негативным контролем.

Рекомендуемый протокол иммуногистохимического окрашивания

Первичное антитело

Параметр Ventana / Roche (SP255) Ventana / Roche (BC28)
КлонSP255BC28
ПроизводительVentanaVentana
№ продукта / № лота790-7219 / M00945Z790-4950 / M11316
ФорматReady-To-Use (prediluted)Ready-To-Use (prediluted)
ДилюентНетНет
Дилюент № продукта / № лота——
Разведение——
Время инкубации / температура32 мин / 36 °C32 мин / 36 °C

Извлечение эпитопа, HIER

Параметр Ventana / Roche (SP255) Ventana / Roche (BC28)
ПриборOn Board / On MachineOn Board / On Machine
БуферVentana Ultra CC1Ventana Ultra CC1
Время нагрева при макс. температуре64 мин64 мин
Максимальная температура нагрева100 °C95 °C

Система визуализации

Параметр Ventana / Roche (SP255) Ventana / Roche (BC28)
ПроизводительVentanaVentana
Продукт / номерOptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700
Инкубация линкера8 мин8 мин
Инкубация полимера8 мин8 мин
Температура инкубации36 °C36 °C

Хромоген

Параметр Ventana / Roche (SP255) Ventana / Roche (BC28)
ПроизводительVentanaVentana
Продукт / номерOptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700
Время инкубации / температура8 мин / 36 °C8 мин / 36 °C
Усилитель—CuSO₄

Иммуностейнер

Ventana / Roche (SP255) Ventana / Roche (BC28)
Ventana Benchmark Ultra Ventana Benchmark Ultra

Разбор типичных вариантов сигнала

Сильный сигнал, фона нет

  • Следующим шагом протестируйте первичное антитело в серии разведений, чтобы получить наивысшее разведение с оптимальным результатом, сохранить реагент и снизить затраты.

Сильный сигнал, слабый фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте фоновое окрашивание.

Сильный сигнал, сильный фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте фоновое окрашивание.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, фона нет

  • Увеличьте концентрацию первичных антител.
  • Увеличьте время инкубации первичного антитела.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, слабый фон

  • Увеличьте концентрацию первичных антител и сократите время инкубации.
  • Усильте блокирование фонового окрашивания.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Слабый сигнал, сильный фон

  • Усильте блокирование фонового окрашивания.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, фона нет

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, слабый фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, сильный фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.
Примечание

Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации (содержания и протоколов иммуногистохимического окрашивания), соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.

Авторы

Авторы и члены редакционного совета: Материал подготовлен экспертами Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии

Юнусов Теймур Юнусович

Юнусов Теймур Юнусович

Президент Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Шилов Александр Викторович

Шилов Александр Викторович

Врач-патологоанатом, руководитель службы контроля качества патологоанатомических исследований, член президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Полина Ксения Константиновна

Полина Ксения Константиновна

Руководитель отдела контроля качества патологоанатомических исследований, член правления Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Вишнякова Виктория Владимировна

Вишнякова Виктория Владимировна

Медицинский технолог службы контроля качества патологоанатомических исследований, член Президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Литература

  1. Livasy CA, Karaca G, Nanda R, Tretiakova MS, Olopade OI, Moore DT, Perou CM. Phenotypic evaluation of the basal-like subtype of invasive breast carcinoma. Mod Pathol. 2005 Dec 2.
  2. Ueo T, Kashima K, Daa T, Kondo Y, Sasaki A, Yokoyama S. Immunohistochemical analysis of morules in colonic neoplasms: morules are morphologically and qualitatively different from squamous metaplasia. Pathobiology. 2005;72(5):269-78.
  3. Varma M, Jasani B. Diagnostic utility of immunohistochemistry in morphologically difficult prostate cancer: review of current literature. Histopathology. 2005 Jul;47(1):1-16.
  4. Weinstein MH, Signoretti S, Loda M. Diagnostic utility of immunohistochemical staining for p63, a sensitive marker of prostatic basal cells. Mod Pathol. 2002 Dec;15(12):1302-8.
  5. pathologyoutlines.com/topic/stainsp63.html
  6. nordiqc.org/epitope.php?id=62