Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии

info@histotechnology.ru
ВСТУПИТЬ В АССОЦИАЦИЮ
anti-CK5, anti-CK5/6 — Антитела к цитокератину 5; цитокератинам 5/6
I — Integrity — Целостность.
K — Knowledge — Знание.
O — Optimization — Оптимизация.
N — Necessity — Необходимость.
I.K.O.N. CONTROL · ПРОТОКОЛЫ К АНТИТЕЛАМ

При поддержке ООО «Рош Диагностика Рус».

anti-CK5
anti-CK5/6

Антитела к цитокератину 5; цитокератинам 5/6. Практический протокол иммуногистохимического окрашивания, контроль качества и разбор типичных вариантов сигнала.

anti-CK5 — иммуногистохимическое окрашивание ткани
Объект: ткани в парафиновом блоке

Что определяет anti-CK5 anti-CK5/6

Антитело вступает в реакцию с щелочными промежуточными филаментными белками — базальными цитокератинами 5 и 6, которые являются структурой цитоскелета базальных клеток и клеток плоскоэпителиального типа.

CK5-позитивны в норме: эпидермис (все слои), базальные клетки респираторного эпителия, мужских половых путей (выводные протоки, придаток яичка, семявыносящий проток и семенной пузырь), базальные клетки молочной железы и миоэпителиальные клетки, мезотелий, базальные клетки предстательной железы, роговица, зона плоскоклеточной метаплазии эндоцервикального канала, сперматогенные клетки, базальные клетки переходного эпителия мочевыводящих путей, базальные клетки эккринных и апокринных желёз, клетки волосяного фолликула, миоэпителиальные клетки ацинусов слюнных желёз, базальные клетки выводных протоков, многослойный плоский эпителий слизистой оболочки полости рта (все слои), многослойный плоский эпителий пищевода (все слои), многослойный плоский эпителий женских половых путей и головки полового члена (все слои), эпителиальные клетки тимуса.

Поэтому anti-CK5 часто используется для обнаружения базальных клеток ацинусов простаты — экспрессия CK5 отсутствует в аденокарциноме предстательной железы.

CK5-позитивны следующие опухоли: плоскоклеточная карцинома (любой локализации), часть карцином молочной железы, карцинома слюнных желёз, уротелиальная карцинома, назофарингеальная карцинома, тимома, эпителиоидная мезотелиома.

Для определения цитокератина 5 часто используют антитела, которые распознают как CK5, так и CK6 (CK5/6). Однако исследования показывают, что во многих случаях диагностическая ценность теста определяется в первую очередь экспрессией CK5, а включение CK6 может снизить специфичность.
Объект исследования

Ткани в парафиновом блоке

Локализация окрашивания

Цитоплазма клеток

Контроли качества

Оптимальный позитивный контроль

Поджелудочная железа и миндалина.

  • Миндалина. Практически все клетки плоского эпителия во всех клеточных слоях должны давать реакцию окрашивания цитоплазмы от умеренной до сильной.
  • Поджелудочная железа. Отдельные кубовидные эпителиальные клетки вставочных протоков должны давать реакцию окрашивания от слабой до умеренной, преимущественно мембранного типа.

Оптимальный негативный контроль

Печень. В гепатоцитах и желчных протоках не должно наблюдаться окрашивания.

Рекомендуемый состав контрольного парафинового мультиблока:
  • Поджелудочная железа + миндалина + печень — для рутинного протокола;
  • Поджелудочная железа + миндалина + печень + аденокарцинома лёгкого + плоскоклеточная карцинома + предстательная железа + эпителиоидная мезотелиома — для валидации протокола исследования.

Рекомендуемый протокол иммуногистохимического окрашивания

Вариант 1 · SP27 · Ventana / Roche

ПараметрЗначение
КлонSP27
ПроизводительVentana / Roche
№ продукта / № лота790-4935 / unknown
ФорматReady-To-Use (prediluted)
Дилоент (разбавитель)нет
Разведение—
Время инкубации / температура16 мин / 36 °C
Извлечение эпитопа, HIEROn Board / On Machine
ПриборVentana Benchmark Ultra
БуферVentana Ultra CC1
Время нагрева при макс. температуре24 мин
Максимальная температура нагрева100 °C
Система визуализацииOptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700
Время инкубации линкера8 мин
Время инкубации полимера8 мин
Температура инкубации36 °C
ХромогенDAB (в составе OptiView, 760-700)
Время инкубации хромогена / температура8 мин / 36 °C
УсилительНет
ИммуностейнерVentana Benchmark Ultra

Вариант 2 · D5/16B4 · Ventana / Roche

ПараметрЗначение
КлонD5/16B4
ПроизводительVentana / Roche
№ продукта / № лота790-4554 / H10522
ФорматReady-To-Use (prediluted)
Дилоент (разбавитель)нет
Разведение—
Время инкубации / температура32 мин / 37 °C
Извлечение эпитопа, HIEROn Board / On Machine
ПриборVentana Benchmark Ultra
БуферVentana Ultra CC1
Время нагрева при макс. температуре48 мин
Максимальная температура нагрева100 °C
Система визуализацииOptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700
Время инкубации линкера8 мин
Время инкубации полимера8 мин
Температура инкубации37 °C
ХромогенDAB (в составе OptiView, 760-700)
Время инкубации хромогена / температура8 мин / 37 °C
УсилительCuSO4
ИммуностейнерVentana Benchmark Ultra

Вариант 3 · D5/16B4 · Dako / Agilent (концентрат)

ПараметрЗначение
КлонD5/16B4
ПроизводительDako / Agilent
№ продукта / № лота—
ФорматConcentrate
Дилоент (разбавитель)Да
Производитель дилоента / №Cell Marque / 938B
Разведение1:25
Время инкубации / температура16 мин / 36 °C
Извлечение эпитопа, HIEROn Board / On Machine
ПриборVentana Benchmark Ultra
БуферVentana Ultra CC1
Время нагрева при макс. температуре48 мин
Максимальная температура нагрева100 °C
Система визуализацииOptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700
Время инкубации линкера8 мин
Время инкубации полимера8 мин
Температура инкубации36 °C
ХромогенDAB (в составе OptiView, 760-700)
Время инкубации хромогена / температура8 мин / 36 °C
УсилительCuSO4
ИммуностейнерVentana Benchmark Ultra

Устранение проблем окрашивания

Сильный сигнал · фон отсутствует

  • Следующим шагом является тестирование первичного антитела в многократных разведениях, чтобы получить наивысшее разведение с оптимальным результатом, сохранить первичное антитело и снизить затраты.

Сильный сигнал · слабый фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте окрашивание фона.

Сильный сигнал · сильный фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте окрашивание фона.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал · фон отсутствует

  • Увеличьте концентрацию первичных антител.
  • Увеличьте время инкубации первичного антитела.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал · слабый фон

  • Увеличьте концентрацию первичных антител и сократите время инкубации.
  • Дальнейшее блокирование окрашивания фона.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Слабый сигнал · сильный фон

  • Дальнейшее блокирование окрашивания фона.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнал отсутствует · фон отсутствует

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнал отсутствует · слабый фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнал отсутствует · сильный фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную вторичную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.
Примечание

Ассоциация специалистов лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации (содержания и протоколов иммуногистохимического окрашивания), соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.

Авторы

Члены редакционного совета и технические исполнители, подготовившие материалы по контролю качества иммуногистохимического окрашивания.

Юнусов Теймур Юнусович

Юнусов Теймур Юнусович

Кандидат биологических наук, Президент Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии

Шилов Александр Викторович

Шилов Александр Викторович

Врач-патологоанатом, руководитель службы контроля качества патологоанатомических исследований, член президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Вишнякова Виктория Владимировна

Вишнякова Виктория Владимировна

Медицинский технолог службы контроля качества патологоанатомических исследований, член Президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Полина Ксения Константиновна

Полина Ксения Константиновна

Руководитель отдела контроля качества патологоанатомических исследований, член правления Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Литература

  1. Cosima Völkel, Noémi De Wispelaere, Sören Weidemann, Natalia Gorbokon, Maximilian Lennartz, Andreas M Luebke, Claudia Hube-Magg, Martina Kluth, Christoph Fraune, Katharina Möller, Christian Bernreuther, Patrick Lebok, Till S Clauditz, Frank Jacobsen, Guido Sauter, Ria Uhlig, Waldemar Wilczak, Stefan Steurer, Sarah Minner, Rainer H Krech, David Dum, Till Krech, Andreas H Marx, Ronald Simon, Eike Burandt, Anne Menz. Cytokeratin 5 and cytokeratin 6 expressions are unconnected in normal and cancerous tissues and have separate diagnostic implications. Virchows Arch. 2022 Feb;480(2):433–447. doi: 10.1007/s00428-021-03204-4.
  2. Mihir A Gudi, Chung Y Yi, Mahrokh Nohadan. Comparing the Diagnostic Outcomes of Staining Various Breast Lesions with Either Anti-CK 5/6 or Anti-CK 5. Iran J Pathol. 2019 Spring;14(2):113–121. doi: 10.30699/IJP.14.2.113.
  3. Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell. 1982;31:11–24.
  4. Chu PG, Weiss LM. Keratin expression in human tissues and neoplasms. Histopathology. 2002 May;40(5):403–439.
  5. Schweizer J, Bowden PE, Coulombe PA, Langbein L, Lane EB, Magin TM, Maltais L, Omary MB, Parry DA, Rogers MA, Wright MW. New consensus nomenclature for mammalian keratins. J Cell Biol. 2006 Jul 17;174(2):169–174.
  6. Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol. 2008 Jun;129(6):705–733.
  7. Chu PG, Lau SK, Weiss LM. Keratin expression in endocrine organs and their neoplasms. Endocr Pathol. 2009 Spring;20(1):1–10.
  8. Miettinen M, Fetsch JF. Distribution of keratins in normal endothelial cells and a spectrum of vascular tumors: implications in tumor diagnosis. Hum Pathol. 2000 Sep;31(9):1062–1067.
  9. Skinnider BF, Folpe AL, Hennigar RA, Lim SD, Cohen C, Tamboli P, Young A, de Peralta-Venturina M, Amin MB. Distribution of cytokeratins and vimentin in adult renal neoplasms and normal renal tissue: potential utility of a cytokeratin antibody panel in the differential diagnosis of renal tumors. Am J Surg Pathol. 2005 Jun;29(6):747–754.
  10. Carrilho C, Alberto M, Buane L, David L. Keratins 8, 10, 13, and 17 are useful markers in the diagnosis of human cervix carcinomas. Hum Pathol. 2004 May;35(5):546–551.
  11. Smedts F, Ramaekers F, Robben H, Pruszczynski M, van Muijen G, Lane B, Leigh I, Vooijs P. Changing patterns of keratin expression during progression of cervical intraepithelial neoplasia. Am J Pathol. 1990 Mar;136(3):657–668.
  12. Matthias C, Mack B, Berghaus A, Gires O. Keratin 8 expression in head and neck epithelia. BMC Cancer. 2008 Sep 22;8:267.
  13. Böcker W, Hungermann D, Weigel S, Tio J, Decker T. Immunohistochemistry in breast pathology: differential diagnosis of epithelial breast lesions. Pathologe. 2009 Feb;30(1):13–19.
  14. Mackinder MA, Evans CA, Chowdry J, Staton CA, Corfe BM. Alteration in composition of keratin intermediate filaments in a model of breast cancer progression and the potential to reverse hallmarks of metastasis. Cancer Biomark. 2012;12(2):49–64.
  15. pathologyoutlines.com
  16. nordiqc.org