При поддержке ООО «Рош Диагностика Рус».
Антитела к трансмембранному негликозилированному белку CD20 — маркёру предшественников B-клеток и зрелых B-лимфоцитов. Практический протокол иммуногистохимического окрашивания, контроль качества и разбор типичных вариантов сигнала для диагностики B-клеточных лимфом.
Антитело к CD20 (anti-CD20) вступает в реакцию с трансмембранным негликозилированным белком, который экспрессируется на предшественниках B-клеток и зрелых B-лимфоцитах. Экспрессия этого белка сохраняется на зрелых B-лимфоцитах до их дифференцировки в плазматические клетки.
CD20-позитивны в норме большинство B-клеток (считаются антигеном всех B-клеток), а также фолликулярные дендритные клетки. CD20-позитивны 90% B-клеточных лимфом при условии отсутствия лечения химерными моноклональными антителами к трансмембранному CD20-антигену (ритуксимаб), острый B-лимфобластный лейкоз/лимфома (40% случаев), лимфома Ходжкина нодулярная форма лимфоидного преобладания (80% случаев), классическая лимфома Ходжкина (20% случаев), мономорфная эпителиотропная кишечная T-клеточная лимфома (аберрантная экспрессия в 20% случаев), веретеноклеточные тимомы.
CD20-негативны опухоли из зрелых T-клеток (нодальные лимфомы из фолликулярных T-хелперов, ALK-позитивная/ALK-негативная анапластическая крупноклеточная лимфома, ВЭБ-позитивная T- и NK-клеточная лимфома), опухоли из предшественников T-клеток (T-лимфобластный лейкоз/лимфома).
Интерпретация окрашивания CD20 строится на оценке интенсивности мембранной реакции и сравнении её с фоновыми структурами. Ниже приведены основные паттерны, наблюдаемые в здоровой ткани и при патологических состояниях.
B-клетки мантийной зоны фолликулов миндалины и аппендикса демонстрируют очень сильную реакцию мембранного окрашивания. Это служит ориентиром для оценки верхнего порога чувствительности протокола.
B-клетки зародышевого центра фолликулов миндалины и аппендикса дают очень сильную мембранную реакцию, аналогичную мантийной зоне. Эпителиальные клетки не окрашиваются.
В криптах червеобразного отростка и в покровном эпителии миндалины рассеянные B-клетки демонстрируют сильную, отчётливую реакцию мембранного окрашивания. Эпителиальные клетки негативны.
Эпителиальные, эндотелиальные клетки и строма не окрашиваются, что подтверждает специфичность реакции и отсутствие фонового сигнала при корректно настроенном протоколе.
До 90% B-клеточных лимфом демонстрируют сильную мембранную реакцию при условии отсутствия предшествующей терапии ритуксимабом. Неопластические B-клетки хронического лимфоцитарного лейкоза обычно показывают слабую или умеренную мембранную реакцию, что важно для оценки аналитической чувствительности.
Ткани в парафиновом блоке
Мембрана клеток
Рекомендуемые позитивная и негативная здоровые контрольные ткани — это миндалина и аппендикс. B-клетки мантийной зоны и B-клетки зародышевого центра должны давать очень сильную реакцию окрашивания, другие клетки окрашиваться не должны. Стоит обратить внимание, что все позитивные клетки имеют интенсивное окрашивание, что не позволяет определить чувствительность протокола по здоровой ткани.
Для оценки аналитической чувствительности и валидации протокола рекомендуется включать в контрольный мультиблок лимфомы и лейкозы с наличием низкой плотности антигена CD20, в частности хронический B-клеточный лейкоз, демонстрирующий слабую или умеренную мембранную реакцию.
Каждое изображение можно заменить — для этого измените атрибут src у соответствующего тега <img>.
| Параметр | Ventana / Roche (L26) | Dako / Agilent (L26) |
|---|---|---|
| Клон | L26 | L26 |
| Производитель | Ventana Roche | Dako / Agilent |
| № продукта / № лота | 760-2531 / J30948 | M0755 / 20083766 |
| Формат | Ready-To-Use (prediluted) | Concentrate |
| Дилюент | Нет | Antibody Diluent |
| Производитель дилюента / № | — | Ventana / 251-018 |
| Титр | — | 1:500 |
| Время инкубации / температура | 16 мин / 36 °C | 16 мин / 36 °C |
| Параметр | Ventana / Roche (L26) | Dako / Agilent (L26) |
|---|---|---|
| Прибор | On Board / On Machine | On Board / On Machine |
| Буфер | Ventana Ultra CC1 | Ventana CC1 |
| Время нагрева при макс. температуре | 32 мин | 24 мин |
| Максимальная температура нагрева | 100 °C | 100 °C |
| Параметр | Ventana / Roche (L26) | Dako / Agilent (L26) |
|---|---|---|
| Производитель | Ventana | Ventana |
| Продукт / номер | OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700 | OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700 |
| Время инкубации линкера | 8 мин | 8 мин |
| Время инкубации полимера | 8 мин | 8 мин |
| Температура инкубации | 36 °C | 36 °C |
| Параметр | Ventana / Roche (L26) | Dako / Agilent (L26) |
|---|---|---|
| Производитель | Ventana | Ventana |
| Продукт / номер | OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700 | OptiView DAB IHC Detection Kit / 760-700 |
| Время инкубации / температура | 8 мин / 36 °C | 10 мин / 36 °C |
| Усилитель | CuSO₄ | CuSO₄ |
| Ventana / Roche (L26) | Dako / Agilent (L26) |
|---|---|
| Ventana Benchmark Ultra | Ventana Benchmark Ultra |
Ассоциация специалистов лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации (содержания и протоколов иммуногистохимического окрашивания), соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.