Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии

info@histotechnology.ru
ВСТУПИТЬ В АССОЦИАЦИЮ
anti-34βE12/CKHMW — Антитела к высокомолекулярным цитокератинам
I - Integrity - Целостность.
K - Knowledge - Знание.
O - Optimization - Оптимизация.
N - Necessity - Необходимость.
I.K.O.N. CONTROL · ПРОТОКОЛЫ К АНТИТЕЛАМ

При поддержке ООО «Рош Диагностика Рус».

anti-34βE12 CKHMW

Антитела к высокомолекулярным цитокератинам 1, 5, 10 и 14 (CK-HMW). Практический протокол иммуногистохимического окрашивания, контроль качества и разбор типичных вариантов сигнала.

anti-34βE12/CKHMW — иммуногистохимическое окрашивание ткани
Объект: ткани в парафиновом блоке

Что определяет anti-34βE12/CKHMW

Антитело, вступающее в реакцию с щелочными промежуточными филаментными белками — высокомолекулярными цитокератинами 1, 5, 10 и 14, которые являются структурой цитоскелета некоторых эпителиальных клеток. В норме экспрессируются в многослойном плоском эпителии, протоковом и других типах сложного эпителия.

CKHMW-позитивны в норме многослойный плоский эпителий, протоковый эпителий, сложный эпителий. Также позитивны базальные клетки ацинусов простаты (экспрессия отсутствует в аденокарциноме простаты).

CKHMW-позитивны плоскоклеточная карцинома, протоковая карцинома молочной железы и поджелудочной железы, холангиокарцинома, карцинома слюнных желез, уротелиальная карцинома, назофарингеальная карцинома, эндоцервикальная и эндометриальная карцинома, карцинома собирательных трубочек почки, тимома, эпителиоидная мезотелиома.

Ключевой принцип: anti-34βE12/CKHMW применяется как маркер базальных и высокомолекулярных цитокератинов — для подтверждения плоскоклеточной и базальноклеточной дифференцировки, а также для диагностики аденокарциномы предстательной железы (потеря базального слоя).
Объект исследования

Ткани в парафиновом блоке

Локализация окрашивания

Цитоплазма клеток

Оптимальный позитивный и негативный контроль

В качестве положительного тканевого контроля рекомендуется использовать пищевод: практически все клетки плоского эпителия должны демонстрировать умеренную или сильную цитоплазматическую реакцию окрашивания во всех слоях клеток. В самых поверхностных клетках реакция окрашивания может быть менее выраженной. Допустимо использовать миндалину: покровный многослойный плоский эпителий миндалины демонстрирует тот же характер цитоплазматической реакции.

В качестве отрицательного тканевого контроля рекомендуется использовать печень: гепатоциты и эпителиальные клетки желчных протоков не должны окрашиваться. Допустимо использовать червеобразный отросток — эпителий слизистой и подслизистой основы служит внутренним негативным контролем.

  • Пищевод + печень или миндалина + аппендикс — для рутинного протокола.
  • Предстательная железа + пищевод + печень + ацинарная аденокарцинома предстательной железы + протоковая карцинома молочной железы + плоскоклеточная карцинома — для валидации протокола.
Ожидаемый паттерн окрашивания в валидационном мультиблоке:
  • Предстательная железа — выраженная цитоплазматическая реакция в базальных клетках ацинусов; секреторные клетки не окрашиваются.
  • Ацинарная аденокарцинома предстательной железы — опухолевые клетки негативны (утрата базального слоя); единичные остаточные базальные клетки могут сохранять окрашивание.
  • Протоковая карцинома молочной железы — выраженное цитоплазматическое окрашивание опухолевых клеток в протоковых структурах.
  • Плоскоклеточная карцинома — выраженная цитоплазматическая реакция во всех слоях опухолевых клеток.
  • Пищевод — служит внутренним позитивным контролем: плоский эпителий ярко окрашен.
  • Печень — служит внутренним негативным контролем: гепатоциты и эпителий желчных протоков не окрашены.

Рекомендуемый протокол иммуногистохимического окрашивания

Первичное антитело

КлонD5/16 B4
ПроизводительDako
№ продукта / № лотаM7237 / 0086636
ФорматConcentrate
Дилюент (разбавитель)Antibody Diluent with Casein
Производитель дилюента / №Ventana / 760-219
Разведение1:25
Время инкубации / температура32 мин / 20 °C

Извлечение эпитопа, HIER

ПриборOn Board / On Machine
БуферVentana Ultra CC1
Время нагрева при макс. температуре64 мин
Максимальная температура нагрева95 °C

Система визуализации

ПроизводительVentana
Продукт / номерUltraView Universal DAB Detection Kit / 760-500
Время инкубации линкера—
Время инкубации полимера8 мин
Температура инкубации37 °C

Хромоген

ПроизводительVentana
Продукт / номерUltraView Universal DAB Detection Kit / 760-500
Время инкубации / температура8 мин / 20 °C
УсилительНет

Иммуностейнер

ПриборVentana Benchmark Ultra
Дополнительный этапCuSO₄

Разбор типичных вариантов сигнала

Сильный сигнал, фона нет

  • Следующим шагом протестируйте первичное антитело в серии разведений, чтобы получить наивысшее разведение с оптимальным результатом, сохранить реагент и снизить затраты.

Сильный сигнал, слабый фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте фоновое окрашивание.

Сильный сигнал, сильный фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител.
  • Сократите время инкубации первичных антител.
  • Сократите время инкубации вторичных антител.
  • Дополнительно заблокируйте фоновое окрашивание.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, фона нет

  • Увеличьте концентрацию первичных антител.
  • Увеличьте время инкубации первичного антитела.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.

Слабый сигнал, слабый фон

  • Увеличьте концентрацию первичных антител и сократите время инкубации.
  • Усильте блокирование фонового окрашивания.
  • Увеличьте время инкубации вторичного антитела.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Слабый сигнал, сильный фон

  • Усильте блокирование фонового окрашивания.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, фона нет

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, слабый фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Увеличьте концентрацию первичных антител и время инкубации.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.

Сигнала нет, сильный фон

  • Следуйте общим подходам шаг за шагом.
  • Попробуйте различные методы поиска антигена.
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции.
  • Обратитесь за помощью в технический отдел основного поставщика антител.
  • Используйте другое первичное антитело.
Примечание

Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации (содержание и протоколов иммуногистохимического окрашивания), соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.

Авторы

Авторы и члены редакционного совета: Материал подготовлен экспертами Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии

Юнусов Теймур Юнусович

Юнусов Теймур Юнусович

Кандидат биологических наук, Президент Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Шилов Александр Викторович

Шилов Александр Викторович

Врач-патологоанатом, руководитель службы контроля качества патологоанатомических исследований, член президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Полина Ксения Константиновна

Полина Ксения Константиновна

Руководитель отдела контроля качества патологоанатомических исследований, член правления Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Вишнякова Виктория Владимировна

Вишнякова Виктория Владимировна

Медицинский технолог службы контроля качества патологоанатомических исследований, член Президиума Ассоциации специалистов в области лабораторной гистотехнологии.

Литература

  1. Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell. 1982;31:11–24.
  2. Chu PG, Weiss LM. Keratin expression in human tissues and neoplasms. Histopathology. 2002 May;40(5):403–39.
  3. Schweizer J, Bowden PE, Coulombe PA, Langbein L, Lane EB, Magin TM, Maltais L, Omary MB, Parry DA, Rogers MA, Wright MW. New consensus nomenclature for mammalian keratins. J Cell Biol. 2006 Jul 17;174(2):169–74.
  4. Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol. 2008 Jun;129(6):705–33.
  5. Chu PG, Lau SK, Weiss LM. Keratin expression in endocrine organs and their neoplasms. Endocr Pathol. 2009 Spring;20(1):1–10. Review.
  6. Miettinen M, Fetsch JF. Distribution of keratins in normal endothelial cells and a spectrum of vascular tumors: implications in tumor diagnosis. Hum Pathol. 2000 Sep;31(9):1062–7.
  7. Skinnider BF, Folpe AL, Hennigar RA, Lim SD, Cohen C, Tamboli P, Young A, de Peralta-Venturina M, Amin MB. Distribution of cytokeratins and vimentin in adult renal neoplasms and normal renal tissue: potential utility of a cytokeratin antibody panel in the differential diagnosis of renal tumors. Am J Surg Pathol. 2005 Jun;29(6):747–54.
  8. Carrilho C, Alberto M, Buane L, David L. Keratins 8, 10, 13, and 17 are useful markers in the diagnosis of human cervix carcinomas. Hum Pathol. 2004 May;35(5):546–51.
  9. Smedts F, Ramaekers F, Robben H, Pruszczynski M, van Muijen G, Lane B, Leigh I, Vooijs P. Changing patterns of keratin expression during progression of cervical intraepithelial neoplasia. Am J Pathol. 1990 Mar;136(3):657–68.
  10. Matthias C, Mack B, Berghaus A, Gires O. Keratin 8 expression in head and neck epithelia. BMC Cancer. 2008 Sep 22;8:267.
  11. Böcker W, Hungermann D, Weigel S, Tio J, Decker T. [Immunohistochemistry in breast pathology: differential diagnosis of epithelial breast lesions]. Pathologe. 2009 Feb;30(1):13–9.
  12. Mackinder MA, Evans CA, Chowdry J, Staton CA, Corfe BM. Alteration in composition of keratin intermediate filaments in a model of breast cancer progression and the potential to reverse hallmarks of metastasis. Cancer Biomark. 2012;12(2):49–64.
  13. pathologyoutlines.com
  14. nordiqc.org