Html code will be here

Антитела к мультицитокератинам (anti-Pan CK) · Протокол ИГХ
Иммуногистохимия · Протокол

Антитела к мультицитокератинам (anti-Pan CK)

Смесь моноклональных клонов AE1 и AE3 для детекции широкого спектра цитокератинов — основной инструмент подтверждения эпителиальной природы опухоли в рутинной патоморфологической практике.

Автор: Шилов А.В. Объект: ткани в парафиновом блоке Редакционный обзор
Клоны
AE1 + AE3
Кислые + щелочные цитокератины
Спектр
CK 1–16, 19
CK 17 и 18 — не детектируются
Локализация
Цитоплазма · мембрана
Эпителиальные клетки и их опухоли
Контроль
Печень + миндалина
Расширенный мультиблок для валидации
01

Что такое anti-Pan CK

Смесь двух клонов моноклональных антител против цитокератинов (AE1 и AE3) вступает в реакцию с кислыми и щелочными промежуточными филаментными белками — структурой цитоскелета эпителиальных клеток. Реагент распознаёт высокомолекулярные цитокератины 1, 2, 3, 4, 5, 6, 10, 14, 15 и 16, а также низкомолекулярные цитокератины 7, 8 и 19. В составе смеси отсутствуют антитела к цитокератинам 17 и 18.

Мультицитокератиновые антитела реагируют с различными типами эпителия, клетками трофобласта, фолликулярными клетками аденогипофиза, печенью. Гепатоциты демонстрируют слабую и умеренную преимущественно мембранозную реакцию, эпителий желчных протоков — выраженное цитоплазматическое окрашивание.

Объект исследования
Ткани в парафиновом блоке
Локализация окрашивания
Цитоплазма и мембрана клеток
Позитивный контроль
Печень + миндалина
Панель для валидации
6 тканей в мультиблоке
02

Реактивность и клиническое значение

Пан-CK-позитивны большинство доброкачественных и злокачественных эпителиальных опухолей, мезотелиомы. Следует учитывать, что положительное окрашивание может наблюдаться и в некоторых неэпителиальных опухолях — герминогенных (эмбриональная карцинома, опухоль желточного мешка), глиомах (эпендимома, астроцитома, глиобластома), хордоме, эпителиоидной саркоме, тимоме. В связи с этим anti-Pan CK редко используется как самостоятельный маркер — чаще в составе широкой панели для подтверждения или исключения эпителиальной природы опухоли.

Детектируемые цитокератины

CK 1CK 2CK 3 CK 4CK 5CK 6 CK 7CK 8CK 10 CK 14CK 15CK 16 CK 19

Не входят в смесь

CK 17CK 18

При необходимости их детекции — добавляйте клоны, специфичные к этим изоформам.

03

Позитивный и негативный контроль

В качестве положительного контроля для мультицитокератина рекомендуется использовать в сочетании печень и миндалину. Крайне важно, чтобы подавляющее большинство гепатоцитов демонстрировали как минимум умеренную, отчётливую реакцию окрашивания цитоплазмы и мембран. В эпителии желчных протоков — сильное цитоплазматическое окрашивание. Стромальные клетки печени не должны окрашиваться.

В соответствии с рекомендациями Международного экспертного комитета, миндалину можно использовать и как положительный, и как отрицательный контроль. Все клетки многослойного плоского эпителия должны давать умеренную или сильную цитоплазматическую реакцию, а лимфоциты — никакой реакции. Диспергированные клетки интерстициального ретикулума могут давать слабую реакцию из-за низкого уровня экспрессии креатинкиназы.

Рекомендуемый состав контрольного мультиблока

Рутинный протокол: печень + миндалина.
Валидация протокола: печень + аппендикс + аденокарцинома лёгкого + плоскоклеточная карцинома лёгкого + светлоклеточная карцинома почки + диффузная B-крупноклеточная лимфома.

Миндалина (H&E)

Покровный многослойный плоский эпителий, лимфоидные фолликулы со светлыми центрами. Препарат окрашен оптимально: нет признаков неравномерного окрашивания, недостаточной фиксации и проводки. Мелкие лимфоциты с конденсированным хроматином, крупные лимфоидные клетки со светлым хроматином, чёткими ядерными мембранами и эозинофильными ядрышками.

Печень (H&E)

Препарат окрашен оптимально. Нет признаков неравномерного окрашивания, недостаточной фиксации и проводки. Нет некрозов ткани, имеются протоки — ключевой ориентир для оценки экспрессии в желчных протоках.

04
05

Рекомендуемый протокол окрашивания

Сопоставление параметров для трёх RTU / концентрированных форматов на платформе Ventana Benchmark Ultra.

Параметр Ventana · RTU Biocare · Concentrate Dako · Concentrate
КлонAE1/AE3/PCK26AE1/AE3 + 5D3AE1/AE3
№ продукта / лота760-2135 / F07799CM 162 A,B,C / 042018M3515 / 10146500
ФорматReady-To-UseConcentrateConcentrate
ДилюентDako K8006Ventana 251-018
Разведение1:501:100
Инкубация8 мин / 36°C32 мин / 36°C32 мин / 36°C
HIER · буферVentana CC1Ventana CC1Ventana Ultra CC1
Нагрев · время95°C · 36 мин100°C · 48 мин100°C · 64 мин
Фермент · протоколПротеаза 3 · 8 мин / 36°C
Система визуализацииUltraView DAB 760-500OptiView DAB 760-700OptiView DAB 760-700
Линкер8 мин8 мин
Полимер8 мин12 мин8 мин
Хромоген · усилительDAB · CuSO₄DAB · CuSO₄DAB · CuSO₄
ИммуностейнерBenchmark UltraBenchmark UltraBenchmark Ultra
06

Поиск и устранение неполадок

Сильный сигнал, фон отсутствует

  • Тестируйте первичное антитело в многократных разведениях для оптимального результата

Сильный сигнал, слабый фон

  • Уменьшите концентрацию первичных антител
  • Сократите время инкубации первичных и вторичных антител
  • Усильте блокировку фонового окрашивания

Сильный сигнал, сильный фон

  • Уменьшите концентрацию и время инкубации
  • Усильте блокировку фона
  • Попробуйте другие методы демаскировки антигена

Слабый сигнал, фон отсутствует

  • Увеличьте концентрацию и время инкубации
  • Переключитесь на более чувствительную систему детекции
  • Попробуйте другие методы поиска антигена

Слабый сигнал, слабый фон

  • Увеличьте концентрацию, сократите время инкубации
  • Усильте блокировку фона
  • Используйте более чувствительную систему детекции
  • Попробуйте другое первичное антитело

Слабый сигнал, сильный фон

  • Усильте блокировку фонового окрашивания
  • Переключитесь на чувствительную систему детекции
  • Используйте другое первичное антитело

Сигнал отсутствует, фон отсутствует

  • Увеличьте концентрацию и время инкубации
  • Попробуйте другие методы демаскировки антигена
  • Переключитесь на более чувствительную детекцию
  • Обратитесь в техподдержку поставщика

Сигнал отсутствует, фон слабый

  • Увеличьте концентрацию и время инкубации
  • Попробуйте другие методы поиска антигена
  • Используйте более чувствительную детекцию
  • Обратитесь в техподдержку поставщика

Сигнал отсутствует, фон сильный

  • Попробуйте другие методы демаскировки антигена
  • Переключитесь на более чувствительную детекцию
  • Обратитесь в техподдержку поставщика
  • Используйте другое первичное антитело

Примечание

Ассоциация специалистов лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации, соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.

07

Литература

Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982;31:11-24
Chu PG, Weiss LM. Keratin expression in human tissues and neoplasms. Histopathology 2002;40(5):403-439
Schweizer J, Bowden PE, Coulombe PA et al. New consensus nomenclature for mammalian keratins. J Cell Biol 2006;174(2):169-174
Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol 2008;129(6):705-733
Chu PG, Lau SK, Weiss LM. Keratin expression in endocrine organs and their neoplasms. Endocr Pathol 2009;20(1):1-10
Miettinen M, Fetsch JF. Distribution of keratins in normal endothelial cells and vascular tumors. Hum Pathol 2000;31(9):1062-1067
Skinnider BF, Folpe AL et al. Distribution of cytokeratins and vimentin in adult renal neoplasms. Am J Surg Pathol 2005;29(6):747-754
Carrilho C, Alberto M, Buane L, David L. Keratins 8, 10, 13, and 17 as markers in cervix carcinomas. Hum Pathol 2004;35(5):546-551
Smedts F et al. Changing patterns of keratin expression during progression of CIN. Am J Pathol 1990;136(3):657-668
Matthias C, Mack B, Berghaus A, Gires O. Keratin 8 expression in head and neck epithelia. BMC Cancer 2008;8:267
Böcker W, Hungermann D, Weigel S, Tio J, Decker T. Immunohistochemistry in breast pathology. Pathologe 2009;30(1):13-19
Mackinder MA et al. Alteration in keratin intermediate filaments in breast cancer progression. Cancer Biomark 2012;12(2):49-64
pathologyoutlines.com — справочный ресурс по иммуногистохимии
nordiqc.org — Nordic Immunohistochemical Quality Control
© Ассоциация специалистов в области лабораторной гистотехнологии · Протокол anti-Pan CK ·