Антитела к мультицитокератинам (anti-Pan CK)
Смесь моноклональных клонов AE1 и AE3 для детекции широкого спектра цитокератинов — основной инструмент подтверждения эпителиальной природы опухоли в рутинной патоморфологической практике.
Что такое anti-Pan CK
Смесь двух клонов моноклональных антител против цитокератинов (AE1 и AE3) вступает в реакцию с кислыми и щелочными промежуточными филаментными белками — структурой цитоскелета эпителиальных клеток. Реагент распознаёт высокомолекулярные цитокератины 1, 2, 3, 4, 5, 6, 10, 14, 15 и 16, а также низкомолекулярные цитокератины 7, 8 и 19. В составе смеси отсутствуют антитела к цитокератинам 17 и 18.
Мультицитокератиновые антитела реагируют с различными типами эпителия, клетками трофобласта, фолликулярными клетками аденогипофиза, печенью. Гепатоциты демонстрируют слабую и умеренную преимущественно мембранозную реакцию, эпителий желчных протоков — выраженное цитоплазматическое окрашивание.
Реактивность и клиническое значение
Пан-CK-позитивны большинство доброкачественных и злокачественных эпителиальных опухолей, мезотелиомы. Следует учитывать, что положительное окрашивание может наблюдаться и в некоторых неэпителиальных опухолях — герминогенных (эмбриональная карцинома, опухоль желточного мешка), глиомах (эпендимома, астроцитома, глиобластома), хордоме, эпителиоидной саркоме, тимоме. В связи с этим anti-Pan CK редко используется как самостоятельный маркер — чаще в составе широкой панели для подтверждения или исключения эпителиальной природы опухоли.
Детектируемые цитокератины
Не входят в смесь
При необходимости их детекции — добавляйте клоны, специфичные к этим изоформам.
Позитивный и негативный контроль
В качестве положительного контроля для мультицитокератина рекомендуется использовать в сочетании печень и миндалину. Крайне важно, чтобы подавляющее большинство гепатоцитов демонстрировали как минимум умеренную, отчётливую реакцию окрашивания цитоплазмы и мембран. В эпителии желчных протоков — сильное цитоплазматическое окрашивание. Стромальные клетки печени не должны окрашиваться.
В соответствии с рекомендациями Международного экспертного комитета, миндалину можно использовать и как положительный, и как отрицательный контроль. Все клетки многослойного плоского эпителия должны давать умеренную или сильную цитоплазматическую реакцию, а лимфоциты — никакой реакции. Диспергированные клетки интерстициального ретикулума могут давать слабую реакцию из-за низкого уровня экспрессии креатинкиназы.
Рекомендуемый состав контрольного мультиблока
Рутинный протокол: печень + миндалина.
Валидация протокола: печень + аппендикс + аденокарцинома лёгкого +
плоскоклеточная карцинома лёгкого + светлоклеточная карцинома почки +
диффузная B-крупноклеточная лимфома.
Миндалина (H&E)
Покровный многослойный плоский эпителий, лимфоидные фолликулы со светлыми центрами. Препарат окрашен оптимально: нет признаков неравномерного окрашивания, недостаточной фиксации и проводки. Мелкие лимфоциты с конденсированным хроматином, крупные лимфоидные клетки со светлым хроматином, чёткими ядерными мембранами и эозинофильными ядрышками.
Печень (H&E)
Препарат окрашен оптимально. Нет признаков неравномерного окрашивания, недостаточной фиксации и проводки. Нет некрозов ткани, имеются протоки — ключевой ориентир для оценки экспрессии в желчных протоках.
Оптимальное и недостаточное окрашивание
CK-PAN · Миндалина · оптимально
Все клетки плоского эпителия демонстрируют яркую и отчётливую реакцию окрашивания цитоплазмы.
CK-PAN · Миндалина · недостаточно
Интенсивность реакции в клетках плоского эпителия значительно снижена — наблюдается только слабая или умеренная реакция цитоплазмы.
CK-PAN · Печень · оптимально
Подавляющее большинство гепатоцитов окрашиваются умеренно с мембранным акцентом, столбчатые клетки желчных протоков — интенсивно.
CK-PAN · Печень · недостаточно
Видны только эпителиальные клетки желчных протоков (CK 7, 8/18, 19). Гепатоциты не окрашены — ложноотрицательный результат.
Рекомендуемый протокол окрашивания
Сопоставление параметров для трёх RTU / концентрированных форматов на платформе Ventana Benchmark Ultra.
| Параметр | Ventana · RTU | Biocare · Concentrate | Dako · Concentrate |
|---|---|---|---|
| Клон | AE1/AE3/PCK26 | AE1/AE3 + 5D3 | AE1/AE3 |
| № продукта / лота | 760-2135 / F07799 | CM 162 A,B,C / 042018 | M3515 / 10146500 |
| Формат | Ready-To-Use | Concentrate | Concentrate |
| Дилюент | — | Dako K8006 | Ventana 251-018 |
| Разведение | — | 1:50 | 1:100 |
| Инкубация | 8 мин / 36°C | 32 мин / 36°C | 32 мин / 36°C |
| HIER · буфер | Ventana CC1 | Ventana CC1 | Ventana Ultra CC1 |
| Нагрев · время | 95°C · 36 мин | 100°C · 48 мин | 100°C · 64 мин |
| Фермент · протокол | Протеаза 3 · 8 мин / 36°C | — | — |
| Система визуализации | UltraView DAB 760-500 | OptiView DAB 760-700 | OptiView DAB 760-700 |
| Линкер | — | 8 мин | 8 мин |
| Полимер | 8 мин | 12 мин | 8 мин |
| Хромоген · усилитель | DAB · CuSO₄ | DAB · CuSO₄ | DAB · CuSO₄ |
| Иммуностейнер | Benchmark Ultra | Benchmark Ultra | Benchmark Ultra |
Поиск и устранение неполадок
Сильный сигнал, фон отсутствует
- Тестируйте первичное антитело в многократных разведениях для оптимального результата
Сильный сигнал, слабый фон
- Уменьшите концентрацию первичных антител
- Сократите время инкубации первичных и вторичных антител
- Усильте блокировку фонового окрашивания
Сильный сигнал, сильный фон
- Уменьшите концентрацию и время инкубации
- Усильте блокировку фона
- Попробуйте другие методы демаскировки антигена
Слабый сигнал, фон отсутствует
- Увеличьте концентрацию и время инкубации
- Переключитесь на более чувствительную систему детекции
- Попробуйте другие методы поиска антигена
Слабый сигнал, слабый фон
- Увеличьте концентрацию, сократите время инкубации
- Усильте блокировку фона
- Используйте более чувствительную систему детекции
- Попробуйте другое первичное антитело
Слабый сигнал, сильный фон
- Усильте блокировку фонового окрашивания
- Переключитесь на чувствительную систему детекции
- Используйте другое первичное антитело
Сигнал отсутствует, фон отсутствует
- Увеличьте концентрацию и время инкубации
- Попробуйте другие методы демаскировки антигена
- Переключитесь на более чувствительную детекцию
- Обратитесь в техподдержку поставщика
Сигнал отсутствует, фон слабый
- Увеличьте концентрацию и время инкубации
- Попробуйте другие методы поиска антигена
- Используйте более чувствительную детекцию
- Обратитесь в техподдержку поставщика
Сигнал отсутствует, фон сильный
- Попробуйте другие методы демаскировки антигена
- Переключитесь на более чувствительную детекцию
- Обратитесь в техподдержку поставщика
- Используйте другое первичное антитело
Примечание
Ассоциация специалистов лабораторной гистотехнологии прилагает все усилия для предоставления точной и актуальной информации. Однако мы не даём гарантии относительно точности предоставленной информации, соответствующей последним достижениям в области иммуногистохимии на любой момент времени.